长非编码rna在脂肪干细胞脂向分化的差异性表达分析

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1、长非编码RNA在脂肪干细胞脂向分化的差异性表达分析中文摘要【目的】成脂分化是一个复杂的过程的，涉及激素刺激，信号转导，基因表达及细胞形态学改变，整个成脂分化是一个由许多转录因子参与形成的网络。lncRNAs可在不同的生物进化过程中发挥作用，包括细胞周期调控，免疫监视，胚胎干细胞多能性等，然而其在成脂分化的分子机制仍未清楚。本研究通过人脂肪来源干细胞(adipose．derivedstemcells，ADSCs)定向脂向诱导分化，成功鉴定后应用高通量筛选技术筛选出有差异表达的lncRNAs，并预测其作用的靶基因。初步建立ADSCs!旨向分化中lncRNAs的相关调控基因、细胞因子

2、表达的网络，找lncRNAs在成脂分化过程中的启动机制及调控通道，为肥胖症的基础治疗提供理论依据。【方法】组织块培养法培养361健康人的ADSCs，对第三代细胞进行流式细胞仪鉴定。每例细胞标本随机分成三组(0d、5d$112d)，分别成脂诱导培养5d和12d后进行油红0染色鉴定。对所有样本进行总IⅢA抽提及质量检测。对每个样本约5“g总RNA进行标记及列阵杂交，应用AxonGenePix4000B微阵点扫描仪扫描芯片的荧光强度。扫描图像输入NimbleScan2．5软件进行网格定测和数据表达分析，通过分位数标准化和软件内置的稳定多片平均值(RMA)对表达数据进行标准化，所有的l

3、ncRNAs被输入到软件AgilentGeneSpringGX11．5．1中进行lncRNAs差异表达谱筛选。每个样本重复筛选3次，将lncRNAs的所有目标值的标准化值≥100挑选出进行数据分析。最后分层聚类分析有差异表达的lncRNAs的表达模型。【结果】第3代ADSCs代表面抗原表达CD29，CD44，CD90，CDl05表达阳性。CD34，CD45，CDl06表达阴性。第3代人脂肪干细胞经成脂诱导剂分别培养5d。12d后用油红O染色，计数脂滴数量，第5d和第12d的脂肪颗粒数是5％和41％。第3代人脂肪干细胞经成骨诱导液诱导后倒置相差显微镜下观察，茜素红染色阳性。总RN

4、A抽提及质量检测结果所有样本A260／A280值在1．80～2．10，均符合要求。对扫描超过1800个人lncRNAs表达谱筛选，人工分析出5个3．0倍以上持续上调的lncRNAs和4个3．0倍以上持续下调的lncRNAs，其中6个有对应的靶基因，3个没有靶基因，只有LncRNAs所在染色体的位置和序列。【结论】本研究通过对人脂肪来源间充质干细胞脂向诱导分化的lncRNAs筛选，得出差异性表达谱，它们可能参与脂肪干细胞脂向分化的调控机制和肥胖症发生，为进一步研究脂肪干细胞成脂分化的信号通路提供新的实验依据。【关键词】脂肪干细胞；成脂分化；lncRNAs测序；lncRNAs表达谱

5、DifferentialExpressionandSignificancesoflncRNAsinHuman【Objective】adipose—derivedstemcells．AbstractAdipogenicdifferentiationisacomplicatedprocessthatincludeshormonestimulus，signaltransduction，geneexpressionchanges，andcellmorphologicalchanges，anetworkformedbymanytranscriptionfactorsisinvolvedi

6、ntheentireadipogenicdifferentiationprocess．GeneexpressionpattemshaveimplicatedtheselincRNAsindiversebiologicalprocesses，includingcell—cycleregulation，immunesurveillance，andembryonicstemcellpluripotency．However，thelncRNAsmolecularmechanismsleadingtoADSCadipogenicdifferentiationisstillnotclear

7、．Thisresearchwillbetoinvestigatehumanadipose—d耐vedstemcells(ADSCs)inducesintoadiposecellsbytissureculture．Afteridentifiedusinghigh-throughputscreeningscreenoutthedifferentiallyexpressedlncRNAsfromthegeneticlevel，andpredictitstargetgenes．Finally，ini