脂多糖下调过氧化物酶增殖体激活受体γ在大鼠原代肺泡ⅱ型上皮细胞的表达

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1、脂多糖下调过氧化物酶增殖体激活受体γ在大鼠原代肺泡Ⅱ型上皮细胞的表达肖波，王建春，王关嵩，邓朝霞，徐静，钱桂生（第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所，重庆400037）摘要：目的　观察脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作用下大鼠肺泡Ⅱ型上皮（typeⅡalveolarepithelial，AT-Ⅱ）细胞过氧化物酶增殖体激活受体γ（PPARγ）的表达变化情况。方法　通过酶消化分离和免疫黏附法纯化原代培养AT-Ⅱ细胞，并进行碱性磷酸酶、肺表面活性物质相关蛋白A（SP-A）和电镜鉴定。采用RT-PCR法检测细胞经LPS作用后PPARγ、TNF-α、SP-AmRNA

2、的改变，Westernblot法检测LPS作用后细胞PPARγ表达，ELISA法检测TNF-α蛋白表达。结果　经碱性磷酸酶、SP-A和电镜鉴定，原代培养AT-Ⅱ细胞成功；在致炎因子LPS作用下，PPARγmRNA和蛋白表达均下降，这一变化伴随炎性因子TNF-α的升高。结论　在LPS作用下，AT-Ⅱ细胞内PPARγ表达降低，提示PPARγ参与炎症反应。关键词：过氧化物酶增殖体激活受体γ；肺泡Ⅱ型上皮细胞；炎症中图法分类：文献标识码：ALPSstimulationdown-regulatestheexpressionofPPARγexpressioninrattypeⅡalveo

3、larepithelialcellsXIAOBo,WANGJian-chun,WANGGuan-song,DENGZhao-xia,XUJing,QIANGui-sheng(InstituteofRespiratoryDiseasesofPLA,XinqiaoHospital,theThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400037,China)Abstract:ObjectiveTodeterminetheeffectofLPSstimulationontheexpressionofPPARγinrattypeⅡalveolarep

4、ithelial(AT-Ⅱ)cells.MethodsRatlungtissuesweredigestedbytrypsaseandcollagenase.AT-Ⅱcellswereisolatedandpurifiedbyimmuno-adherence,andthenprimarilyculturedAT-Ⅱcellswereidentifiedbyalkalinephosphatase(AKP)、,pulmonarysurfactant-associatedproteinA(SP-A)stainingandelectronmicroscopy.PPARγ、,TNF-αa

5、ndSP-AmRNAlevelsinAT-ⅡcellswereassayedbyRT-PCRafterbeingactivatedbylipopolysaccharide(LPS)stimulation,whilethePPARγandTNF-αproteinlevelsinculturesupernatantsweremeasuredbyWesternblottingandELISArespectively.ResultsPrimarycultureofratAT-Ⅱcellsweresuccessfullyestablishedasconfirmedbytheexpres

6、sionofAKPandSP-Aandunltrastructuralfeatures.PPARγexpressioninAT-ⅡcellsweredecreasedwhenstimulatedwithLPS,whichwereaccompaniedbyincreasedTNFαexpression.ConclusionPro-inflammatorysubstanceLPScanmarkedlyinhibitedtheexpressionofPPARγinAT-Ⅱcells,whichcouldbeinvolvedinthelossofcontrolofinflammati

7、on.Keywords:PPARγ;typeⅡalveolarepithelialcell;inflammation过氧化物酶增殖体激活受体γ（PPARγ）是核受体超家族非类固醇激素受体中PPARs的一个亚型，广泛分布于机体内，其主要生理功能在于调节血脂、血糖代谢和细胞生长、分化，近年来研究发现其还具有抗炎作用而倍受关注[1]。大鼠肺泡Ⅱ型上皮（typeⅡalveolarepithelial，AT-Ⅱ）细胞是急性肺损伤（ALI）/急性呼吸窘迫综合征（ARDS）发病过程中的主要受损细胞[2]，但PPARγ