过氧化物酶体增殖物激活受体γ在大肠肿瘤中的表达的论文

《过氧化物酶体增殖物激活受体γ在大肠肿瘤中的表达的论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ在大肠肿瘤中的表达的论文【摘要】目的在蛋白及mrna水平确定过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxiomeproliferatoractivatedreceptorγ,pparγ）在大肠肿瘤中的表达。方法结肠镜下活检标本，分为正常大肠粘膜组、大肠腺瘤组及大肠癌组，免疫组化及rtpcr方法检测各组pparγ的表达。结果正常大肠粘膜中表达pparγ蛋白的细胞主要是接近肠腔，分化良好的腺上皮细胞；而在大肠腺瘤中，pparγ阳性的细胞呈弥漫分布。pparγ蛋白及mrna在大肠癌中的表达显著增加，明显高

2、于大肠腺瘤和正常大肠粘膜(p<0.05)。pparγ蛋白及mrna在正常大肠粘膜及腺瘤中的表达无差异（p>0.05）。pparγmrna在重度异型增生腺瘤中的表达高于正常大肠粘膜(p<0.05)，接近于在大肠癌中的表达（p>0.05）。结论大肠腺瘤最先发生pparγ表达部位的变化,pparγ在重度异型增生的大肠腺瘤及大肠癌中的表达水平较高，表明pparγ可能在早期即参与大肠癌的发生发展。【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受体γ大肠腺瘤大肠癌大肠癌多数由大肠腺瘤演变而来，其发生的经典多步骤模式为“腺瘤—腺癌序

3、列”。过氯化物酶体增殖物激活受体γ(peroxiomeproliferatoractivatedreceptorγ,pparγ)是由配体激活的核转录因子ppars的一个亚型，与消化道肿瘤关系密切。.有研究发现pparγ在大肠粘膜细胞中有表达，本研究旨在蛋白水平和mrna水平确定大肠肿瘤中pparγ的表达情况。1材料与方法1.1材料收集、分组所有组织均取自北医三院消化科结肠镜下活检标本，并经病理诊断证实。正常大肠粘膜15例、大肠腺瘤16例及大肠癌上皮15例行免疫组织化学染色。正常大肠粘膜24例、大肠腺瘤58例(其中重度异型增生

4、大肠腺瘤14例)及大肠癌上皮38例行rtpcr。1.2pparγ的免疫组化染色组织取材后于福尔马林中固定、脱水、常规石蜡包埋、切片（厚4μm）→铺于多聚赖氨酸涂布的载玻片上→常规脱蜡至水→0.1mpbs浸泡5min→抗原修复（0.1m枸橼酸盐缓冲液预热至92℃～98℃，放入玻片，微波炉内92℃～98℃加热5min，自然冷却至室温）→0.1mpbs冲洗5min→3%过氧化氢孵育10min，消除内源性过氧化物酶活性→0.1mpbs冲洗5min→滴加封闭用正常山羊血清（北京中山生物科技公司），室温孵育15min，倾去→滴加1∶20稀

5、释的鼠抗人pparγ单克隆抗体(一抗，santacruz生物技术公司，美国)，4℃过夜。→0.1mpbs冲洗5min→滴加生物素标记羊抗小鼠igg（二抗，北京中山生物科技公司），37℃孵育15min→0.1mpbs冲洗5min→滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液（北京中山生物科技公司），37℃孵育15min→0.1mpbs冲洗→dab显色，自来水充分冲洗→苏木素复染后封片。阴性对照用正常山羊血清代替一抗。pparγ阳性反应表现为细胞核和胞浆呈棕褐色。每张切片选取3～5个视野，用《真彩色病理图像分析系统4.0》（北航图像中心）对免疫组

6、化染色结果进行分析，计算面密度(阳性目标总面积/统计场总面积)，并进行统计。1.3rtpcrtrizol（invitrogen公司）提取组织总rna，适量depc水溶解后，分光光度计（uv1601，shimadzu）测od260及od280的值及电泳测定rna浓度及纯度；各取2μg的rna，impromiirt试剂盒（promega公司）将rna逆转录为cdna；taqdna聚合酶（北京泛基诺科技有限公司）作用下进行pcr反应（pcr仪为geneamp9700，美国appliedbiosyetems公司）。反应条件见表1。

7、阴性对照不加逆转录酶，代以去离子水，余反应条件同前。内参βactin及目的基因pparγ的pcr产物各6μl于1.5%琼脂糖凝胶75v/cm恒压电泳，eb染色后在紫外灯下观察，清晰见341bp和500bp的条带，在imagemaster凝胶成像系统仪（quantity0ne，美国柯达公司）下分析。pparγ与βactin电泳条带灰度的比值代表各组pparγ的表达水平。1.4统计学分析结果用±s表示。采用spss11.0软件分析。计量资料的组间比较采用单因素方差分析，p<0.05认为差异有统计学意义，p<0.01认

8、为差异极具统计学意义。2结果2.1pparγ蛋白在人正常大肠粘膜、大肠腺瘤及大肠癌中的表达免疫组化结果显示：在正常大肠粘膜、大肠腺瘤及大肠癌中均有pparγ的表达。正常大肠粘膜组织中表达pparγ的细胞主要是接近肠腔、分化良好的腺上皮细胞，见图1a；而在大肠腺瘤