过氧化物酶体增殖物激活受体γ在腹膜间皮细胞中的表达及其抗炎作用研究

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1、中山大学博士学位论文腹膜间皮细胞中PPARY的表达及其抗炎作用研究过氧化物酶体增殖物激活受体丫在腹膜间皮细胞中的表达及其抗炎作用研究博士研究生：张云芳导专师：阳晓教授业：内科学中文摘要腹膜炎仍然是导致腹膜透析(腹透)失败的主要原因。近年来，革兰阴性细菌所致的腹透相关性腹膜炎发生率显著上升。革兰阴性细菌产物脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)是诱导腹膜炎的重要致病成分。共同刺激信号CD40．CD40配体(CD40LigaIld，CD40L)是免疫细胞问重要的信号转导分子。CD40．CD40

2、L相互作用不仅在体液免疫和细胞免疫中发挥重要作用，而且在炎症反应中起重要作用。细胞问黏附分子(ICAM．I)是炎症过程中的一种关键性粘附分子，白细胞跨问皮细胞移行于腹腔依赖于间皮细胞表达ICAM．I。核因子1(B(NF．1出)是细胞因子信号转导的重要通路，在LPS介导的炎症反应中有重要作用。LPS通过与其受体结合，直接活化NF．1cB信号通路蛋白，诱导下游效应基因如IL．1、IL．6、n吓．a、IL．12等的表达。过氧化物酶体增殖物激活受体Y(peroxisomeproli凫rator—蟊ctivated

3、receptorY，PPAR丫)是配体依赖激活的核受体超家族中的一个亚家族成员(其翻译产物有两种，即Pp：AR丫l和PP舢Ⅵ2组成)，表达于全身多个组织器官如肾脏、肝脏、胃肠道、乳腺和脾脏等，主要参与糖脂代谢和脂肪细胞分化。PPA脚在多种免疫活性细胞中的高表达可发挥重要的抗炎、抗增生和抗肿瘤作用。近年研究报道PPAR丫可通过抑制NF．KB、AP．1等转录因子活性而发挥广泛的抗炎效应。PPAR丫配体主要有天然配体(15d．PGJ2)和人工合成配体(如罗格列酮、西格列酮等)两大类，通过PPA脚依赖和非依赖性机

4、制从不同水平调控细胞内多个炎症信号转导途径。其中对促炎症介质基因的转录中山大学博士学位论文腹膜间皮细胞中PPARY的表达及其抗炎作用研究抑制是其抗炎效应的主要分子基础。我们以往的研究发现，人和大鼠腹膜问皮细胞功能性表达CD40，腹膜间皮细胞CD40高表达及活化介导的ICAM．1分泌增加参与CAPD相关性腹膜炎的发生发展。然而，腹膜问皮细胞能否表达PPA脚?PPA脚活化对腹膜间皮细胞表达CD40和ICAM．I有无影响?活化PP：鲥h是否通过NF．1cB信号通路调节CD40和ICAM．I表达?腹腔局部使用PP

5、A脚配体能否抑制LPS诱导的腹腔局部炎症反应?有关这些问题的研究目前相关文献报道甚少。因此，本研究拟从体外实验和体内实验角度探讨PPAR7在腹腔局部防御中的作用及其机制。第一部分体外研究第一章PPAlq在腹膜间皮细胞中的表达及其对LPS诱导的CD40和ICAM．I表达的影响(一)目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体丫(PPA脚)在大鼠腹膜间皮细胞(I冲MCs)中的表达以及LPS的调节作用，并探讨PPA脚天然配体l5d．PGJ2及人工合成配体西格列酮(Ciglitazone)对LPS诱导RPMCs表达CD40

6、和ICAM—I的影响。(二)方法分离、培养I冲MCs，常规传代及鉴定，取第二代细胞用于实验研究。LPS不同浓度(o“g／ml，0．1甥／ml，10p∥ml，50pg／ml，100“g／m1)、LPS(1pg／m1)处理后不同时间点及15d．PGJ2(3“M)、Cigli饥Ⅺne(10弘M)作用于细胞36h后收集细胞；R1、-PCR检测PPA脚、CD40以及ICAM．1mRNA表达；免疫细胞化学法检测PPAR丫在RPMCs中的分布；W_estem印迹检测PP：A脚及ICAM．I蛋白表达。(三)结果1．培养的

7、砌，MCs呈多边形、菱形、椭圆形，大小不等；细胞融合后，具中山大学博士学位论文腹膜问皮细胞中P队Ry的表达及其抗炎作用研究有典型的鹅卵石状或铺路石样上皮细胞形态。传代后用抗大鼠Kemtin、抗vimentin(波形蛋白)抗体检测相关抗原，结果抗大鼠Keratin、Vimentin表达阳性。2．常规培养的RPMCs表达一定量PPA脚，表达部位主要分布于RPMCs细胞核内，细胞浆微弱表达；随着LPS浓度逐渐增大，PP—6岫蛋白表达水平呈逐渐增高的趋势，LPS浓度为10“∥ml时其表达达最高峰(p<0．05)。

8、LPS(1鸺／m1)作用12hPPAR丫蛋白表达最强(p0．05)，但显著抑制ICAM-I蛋