cho细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒感染的影响

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1、CHO细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒感染的影响张俊磊1，高娜2，陈炜1，陈宗涛1，徐小峰1，安静3（1第三军医大学基础医学部：微生物学教研室，重庆市微生物工程实验室，2组胚教研室,重庆400038;3首都医科大学微生物学教研室北京100069）摘要：目的检测CHO细胞中稳定表达人整合素β3对登革2型病毒(DV2)感染的影响。方法将表达人整合素β3的质粒转染CHO细胞，通过G418筛选、流式细胞学检测和间接免疫荧光实验，建立稳定表达整合素β3的CHO细胞株；利用该细胞株进行感染实验，检测人整合素β3稳定表达对DV2易感性的影响。结果共获得了4个高表达整合素β3的细胞克隆C

2、9，C10，F8和H6，其中克隆F8中整合素β3的表达水平最高，是对照组的1.89倍。感染实验发现，进入整合素β3高表达的细胞株的病毒数量均有所增高，增高的比例与整合素β3的表达增高趋势基本一致，进入F8细胞株的病毒量最高，是对照细胞的2.63倍，说明整合素β3有助于DV2进入细胞。结论在CHO细胞中外源性表达整合素β3可以提高DV2的感染率。关键词：登革病毒；整合素β3；CHO细胞中图法分类号：文献标识码：ATheeffectofrecombinantβ3integrinonDV2infectioninCHOcellsZHANGJun-lei1,GAONa2，CHENWei1,

3、CHENZong-tao1,XUXiao-feng1andANJing3*（1DepartmentofMicrobiology,2DepartmentofHistologyandEmbryology,CollegeofMedicine，ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing,400038;3DepartmentofMicrobiology,SchoolofBasicMedicalSciences,CapitalMedicalUniversity,Beijing,100069,China）Abstract:ObjectiveTostudyt

4、heeffectofrecombinantβ3integrininDV2infectionofCHOcells.MethodsExpressionplasmidcodingβ3integrinwastransfectedintoCHOcellsusingthelipofectaminereagent.StableCHOcelllinesexpressingthehumanβ3integrinwasselectedinG4l8anddetectedusingflowcytometry.Thestablecelllineswereusedtodeterminewhetherβ3int

5、egrinexpressionfacilitatesDV2infectivity.ResultsThestabletransfectedCHOvariantcelllinesC9，C10，F8andH6expressingthehumanβ3integrinwereselected.Thelevelofβ3integrinexpressioninF8wasthehighest,whichwas1.89-foldofparentalCHOcells.AllthevariantcelllinesweremoresusceptibletoDV2infection,andF8cellli

6、newasespecially2.63timesofparentalCHOcells.ConclusionRecombinantβ3integrinpromotedDV2infectionofCHOcells.Keywords：Denguevirus;β3integrin;CHOcells登革病毒(denguevirus，DV)是黄病毒属的单股正链RNA病毒，四个血清型(DV1-4)均可引起人类登革热和登革出血热/登革休克综合症(DHF/DSS)。DV感染内皮细胞的受体目前尚未阐明。前期实验中，我们研究了多种整合素分子在DV2感染中的作用，发现整合素ανβ3在DV2感染原代人真皮

7、微血管内皮细胞（HMEC-1）中有重要作用：阻断整合素ανβ3的功能可部分的抑制DV2进入HMEC-1细胞；可溶性整合素ανβ3可以有效的阻断DV2进入HMEC-1细胞；用RNA干扰方法下调整合素β3的表达，可抑制DV2的感染率，提示整合素β3可能是DV2进入内皮细胞所必需的[1]。为了进一步确定整合素β3在DV2感染中的作用，本实验将编码人整合素β3的质粒转染CHO细胞，在该细胞中表达人整合素β3蛋白，观察对DV2感染的影响。1材料方法：1.1材料1.1.1细胞株和病毒株CHO