登革2型病毒e基因克隆及b细胞抗原表位分析

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1、从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果登革2型病毒E基因克隆及B细胞抗原表位分析作者：贡树基周浩陈丽丹梁冰锋【摘要】目的扩增登革病毒2型新几内亚株E基因，并进行B细胞抗原表位分析。方法根据登革2型病毒NGC株E基因序列设计引物，采用RTPCR技术扩增NGC株E基因并克隆至pGEMT载体，转化大肠杆菌DH5α后测序。按KyteDoolittle方案、JamesonWolf方案和Emini方案预测B细胞抗原表位。结果通过RTPCR方

2、法，获得了登革2型病毒NGC株E基因，并对登革2型病毒NGC株E基因进行B细胞抗原表位预测。结论通过RTPCR方法，获得了登革2型病毒NGC株E基因，为制备登革2型病毒E基因单克隆抗体和疫苗打下基础。【关键词】登革病毒；E基因；B细胞抗原表位　　【Abstract】ObjectiveToamplifytheEgeneofdenguevirusNGCandanalyzetheBcellepitopeofEprotEin.MethodsAccordingtothesequencesofNGCEgene,apairofprimerswe

3、redesignedfortheamplificationoftheEgenefragmentfromtheisolateofdenguevirusNGCwithRTPCR.TheamplifiedEfragmentwasclonedintovetorpGEMTandsequenced.课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果

4、TheBcellepitopeofEprotEInofdenguevirusNGCwasanalyzedbyKyteDoolittlemethod、JamesonWolfmethodandEminimethod.ResultsThe18bplengthEgeneofdengueviruswasamplifiedsuccessfullybytheRTPCR.TheBcellepitopeofdengueviruswaspredicted.ConclusionTheEgeneofdengueviruswassuccessfully

5、amplifiedbytheRTPCR．AnditwillbeadvantageousformonoclonalantibodyandvaccinepreparationofEgeneofdenguevirus.　　【Keywords】Denguevirus；Egene；Bcellepitope登革病毒属黄病毒科黄病毒属，基因组为单股正链RNA，全长约11kb，包括5'和3'非编码区及一个开放阅读框。DEN共有4个血清型，均可引起登革热、登革出血热和登革休克综合征，通常登革2型病毒的感染较其他血清型更为严重［14］。　　大量研究

6、课题份量和难易程度要恰当，博士生能在二年内作出结果，硕士生能在一年内作出结果，特别是对实验条件等要有恰当的估计。从本学科出发，应着重选对国民经济具有一定实用价值和理论意义的课题。课题具有先进性，便于研究生提出新见解，特别是博士生必须有创新性的成果表明，E蛋白作为登革病毒重要的抗原蛋白，它不仅是登革病毒主要的毒力蛋白，而且还带有型特异、属特异抗原决定簇。E蛋白存在诱导中和抗体及血凝作用有关的抗体表位，它能诱导宿主产生保护性的中和抗体，又能诱导产生血凝抑制抗体，可引起宿主保护性免疫反应，此外还与DHF和DSS的致病机制有关。同时，E蛋白

7、在毒粒侵染细胞过程中起重要作用，E蛋白上可能具有某些宿主细胞表面受体结合的配体。因此，获得高纯度的E蛋白为制备登革病毒高效、特异的单克隆抗体和研究宿主细胞上登革病毒受体有重要意义，还为进一步探讨DHF、DSS的致病机制提供坚实的基础。本研究通过RTPCR方法，构建了登革2型病毒新几内亚株(NGC)E基因的克隆载体，并对其E蛋白进行B细胞抗原表位分析，为制备登革2型病毒E基因单克隆抗体和疫苗奠定了基础。　　1材料与方法病毒RNA制备登革2型病毒NGC株经鼠脑内接种传代后，取1/2发病鼠脑，用Trizol提取总RNA，于-70℃保存备

8、用。PCR引物设计根据登革2型病毒NGC株基因组全序列用Primer软件设计引物，PCR引物序列及位置：P1引物：5'atgcgttgcataggaatatcaaata3'，位于其基因组的937处；P2引物：5'ggcctgca