一株新型噬藻体的分离与鉴定

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1、分两批从武汉东湖采集不同营养水平湖区的水样，用于：1、采用平板划线法分离纯化蓝藻；2、采用连续稀释法分离噬藻体。噬藻体的纯化采用蔗糖密度梯度离心法。结果为：分离得到3株感染湖生蓝丝藻（Limnothrixplanktonica｝的噬藻体，这是首次关于感染湖生蓝丝藻（L.Plcmk伽ica）裂性噬藻体的报道。其中，L-DHS1为dsDNA病毒，基因组大小为约20kb,感染LPlanktonicaDH5的潜伏期为22h,裂解周期为22〜30h，鉴于L-DHS1的衣壳由一个细长的头部和一根灵活的不可收缩

2、的长尾巴组成，该噬藻体应属于长尾病毒科（Sipho血idaQ。此外，L-DHS1有一个很特别的“围脖”结构，该结构在噬藻体（乃至噬菌体）中均为首次发现。关键词：噬藻体；“围脖”；湖生蓝丝藻；长尾病毒科AbstractTwobatchesofwatersamplesweretakenfromthedifferentnutrientlevelofWuhanDonghulakeandNanhulakeatdifferenttime.Watersampleswereusedfor:1,separation

3、andpurificationofalgaebyplate-streakingmethod;2,isolationofcyanophagcsbyserialdilutionmethod.Purificationofcyanophageswasperformedbysucrosegradientdensitycentrifugation.Theresultsindicatedthat:threephagestrainsthatcouldinfectLimnothrixplanktonicaDH5we

4、reisolatedfromDonghulakeandNanhulake.ItisthefirstreportoflyticcyanophagethatcaninfectL.planktonica.Amongthem,theL-DHS1wasdsDNAviruswithgenomesizeof20kb,itslatentperiodandlyticcyclewere22hand22~30hrespectively(byinfectingL.PlanktonicaDH5).L-DHS1hadatyp

5、icalSiphoviridaebacteriaphagestructureconsistingofanelongatedheadandaverylongflexible,non-contractiletail.Moreover,L・DHS1hasaveiyspecial"neckerchief^structure;the“neckerchief'isnotonlythefirsttimetobefoundincyanophage,butalsothefirsttimetobeobservedin

6、bacteriophage.Keywords:cyanophage;"neckerchief";Limnothrixplanktonica^Siphoviridae摘要1.1背景资料1.1.1噬藻体的定义与分类1.1.2噬藻体的分离方法1.2本研究的目的及意义1.3技术路线2材料和方法2.1蓝藻的分离和鉴定62.2蓝藻菌株及其培养方法62.3噬藻体的分离、纯化和增殖62.4宿主范围实验2.5噬藻体基因组大小的确定及限制性内切图谱2.6透射电子显微镜(transmissionelectronmicr

7、oscopy,TEM)观察72.7裂解周期的确定73结果3.1宿主蓝藻的分离与鉴定83.2噬藻体的分离结果83.3噬藻体L-DHS1的鉴定93.3.1形态观察93.3.2裂解周期1010致谢12参考文献131.1背景资料1.1.1噬藻体的定义与分类噬藻体是一类可以感染原核藻类（包括蓝藻和原绿藻）的病毒。现在，噬藻体以在海洋中控制初级生产力⑴和在淡水中控制蓝藻水华爆发⑵而闻名。根据噬藻体的形态不同,国际病毒学分类委员会（ICTV）细菌病毒分会参照噬菌体的分类方式，将噬藻体分为三个科：肌病毒科（含有一

8、条中央管和能伸缩的尾巴）、长尾病毒科（含有长的、不能伸缩的尾巴）和短尾病毒科（尾巴较短）。1.1.2噬藻体的分离方法冃前，噬藻体分离的研究仅限于（1）裂性病毒和（2）感染可培养宿主的病毒，也就是说，多数的噬藻体（宿主不可培养和慢性或温和感染的噬藻体）是不能被分离。样本在筛选Z前应预过滤或离心，然后才能分离。例如，先用0.8-1.2um孔径大小的玻璃纤维或PCTE过滤器去除较大的颗粒和生物体，再用0.2uni或0.45um孔径大小的低蛋口结合性的PVDF过滤器（微孔Durapore）