产油微藻油体的积累、分离与表征

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1、中图分类号：Q946单位代码：10425学号：Z12030243产油微藻油体的积累、分离与表征TheEnrichment,IsolationandCharacterizationofLipidDropletsfromOleaginousMicroalgae工程领域：生物工程研究方向：生物能源工程作者姓名：邴欣校内导师：于道永副教授现场导师：杨孟龙教授级高工二〇一五年六月TheEnrichment,IsolationandCharacterizationofLipidDropletsfromOleaginousMicroalg

2、aeAThesisSubmittedfortheDegreeofMasterofBiologicalEngineeringCandidate:XinBingSupervisor:AssociateProfessorDaoyongYuProfessorMenglongYangCollegeofChemicalEngineeringChinaUniversityofPetroleum(EastChina)关于学位论文的独创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在指导教师指导下独立进行研究工作所取得的成果，论文中有关资料和数据是实

3、事求是的。尽我所知，除文中已经加以标注和致谢外，本论文不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得中国石油大学（华东）或其他教育机构的学位或学历证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对研究所做的任何贡献均已在论文中作出了明确的说明。若有不实之处，本人愿意承担相关法律责任。学位论文作者签名：____________日期：年月日学位论文使用授权书本人完全同意中国石油大学（华东）有权使用本学位论文（包括但不限于其印刷版和电子版），使用方式包括但不限于：保留学位论文，按规定向国家有关部门（机构）送交学位论文，以学术

4、交流为目的赠送和交换学位论文，允许学位论文被查阅、借阅和复印，将学位论文的全部或部分内容编入有关数据进行检索，采用影印、缩印或其他复制手段保存学位论文。保密学位论文在解密后的使用授权同上。学位论文作者签名：____________日期：年月日指导教师签名：________________日期：年月日摘要产油微藻是生产生物柴油的重要原料，为了提高微藻细胞的含油量，需要对微藻的油脂积累和代谢途径进行探索。油体是细胞内油脂储存和代谢的重要细胞器，对它进行深入研究对提高细胞内油脂积累等具有重要意义。本课题以布朗葡萄藻、亚心形扁藻为研

5、究对象，分别探索了基于尼罗红染色的油脂含量测定方法和油体积累方法。随后，对油体的分离方法进行探索。最后对分离的油体进行粒径大小、油脂成分、蛋白组成等方面的表征。通过探索染色前处理和染色条件，优化了葡萄藻的染色方法：藻液摇匀后超声波处理3min，离心去除培养基，用体积分数8%的DMSO水溶液重悬细胞，调整悬液OD750到0.16，每1mL样品加入10μL120μg/mL左右的尼罗红溶液，40℃水浴10min，激发光波长520nm。随后用相同的方法探索了亚心形扁藻的油脂测定条件，并确定关键参数为：DMSO体积分数4%、尼罗红浓度

6、大于0.7μg/mL、细胞浓度OD750=0.3。通过探索，本课题建立了针对上述两种微藻细胞的油脂测定方法，实现了准确、快速地对这两种微藻进行油脂含量的测定。通过改进培养装置、筛选培养基等方法提高了两种微藻的生物量，并通过高强度光照提高了细胞内油脂含量，为油体分离实验提供了足够的原材料。随后，分别对两种微藻细胞内油体的分离方法进行探索，通过探索细胞破碎条件、破碎液除杂条件、蔗糖梯度离心条件、纯化条件等，成功从两种微藻中分离到完整的油体。随后对油体进行了初步表征，结果表明：（1）布朗葡萄藻中油体粒径约为1.1μm，亚心形扁藻油

7、体粒径约为0.6μm；（2）两种藻细胞油体中的油脂都以甘油三酯为主，布朗葡萄藻油体中可能还有甘油二酯和固醇酯；（3）两种微藻油体中没有鉴定出与高等植物有同源性的油体特异性蛋白。在课题最后，通过双向电泳技术基本实现了对油体蛋白的进一步分离，这为后序微藻油体上新蛋白的鉴定奠定了基础。关键词：产油微藻，油体，分离，表征iTheEnrichment,IsolationandCharacterizationofLipidDropletsfromOleaginousMicroalgaeXinBing(Bioengineering)Dir

8、ectedbyAssociateProfessorDaoyongYuAbstractOleaginousmicroalgaeisimportantfeedstockforbiodieselproduction.Researcheffortsthatexploremechanismsofli