角膜新生血管相关的长链非编码rna(lncrnas)的鉴定及其调控机制研究

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1、南京医科大学博士学位论文分类号：R77单位代码：10312密级：学号：20112711南京医斜大学博士学位论文(专业学位)题目：盘送逝生血笪担差鲍筮鲑韭缉翌塞堂!!旦垡基堂曼2鲍鉴塞丛基迥控扭剑狃窒万方数据南京医科大学博士学位论文南京医科大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除了文中特剐加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体己经发表或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。作者签名：t豉秒苞日期

2、：矽修年歹月≯z日导师签名：妒日期：矿‘寸年朗t1学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“4”)：1、保密口，在一年解密后适用本授权书。2、不保密口。作者签名：《虽覆日期：少了聿J月7阳导师签名：日期：∥，年7月p吒万方数据南京医科大学博士学位论文目录中文摘要1英文

3、摘要3前言6正文91第一部分角膜新生血管相关的长链非编码RNA(LncRNAs)的鉴定91．材料与方法92．结果143．讨论242第二部分NR033585对人脐静脉内皮细胞功能的影响261．材料与方法262．结果333．{，寸{念．．．．．．．．．．．．．．．．．．。。．．．．．．．．．．．．．363．结论374．参考文献38综述与参考文献42附录一：中英文缩略词74附录二：文章发表情况75致谢76万方数据南京医科大学博士学位论文角膜新生血管相关的长链非编码RNA(1ncRNAs)的鉴定及其调控机制研究博士研究生：黄瑾导师：蒋沁中文摘要目的：正常的角

4、膜组织没有血管，周围血管终止于角膜缘，在角膜缘形成血管网，营养成分由此扩散入角膜。无血管化是角膜的主要特征，也是其完全透明，维持正常视力的重要因素。在炎症、感染、化学伤、变性等疾病中或由于眼科手术，维持角膜无血管的平衡因素被破坏，角膜会发生病理性新生血管，导致角膜丧失透明，从而最终影响视力，同时角膜新生血管(cornealneovascularization，CN)也是角膜移植手术发生排斥的高危因素。长链非编码RNA(1ncRNAs)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子，转录水平低于蛋白质编码基因，具有组织特异性。它们并不编码蛋白，而是以RNA

5、的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控众多生物学过程。CN发病机制复杂，受到各个基因层面的调控，目前对lncRNAs在CN中的研究尚在起步阶段，有必要筛选和鉴定与CN有关的lncRNAs，阐明其作用机制，为CN的治疗提供新的药物靶点。本论文旨在建立小鼠的新生血管模型，鉴定小鼠新生血管角膜相关的lncRNAs，并研究其在CN发生发展中的潜在的调控机制。方I法：建立碱烧伤诱导的小鼠角膜新生血管模型，采用lncRNAs微阵列基因芯片技术分析lncRNAs在正常角膜和新生血管化角膜(CN)组织的表达谱，筛选差异表达的lncRNAs；

6、根据Pearson相关性分析，构建1ncRNAs／mRNA共表达网络；通过万方数据南京医科大学博士学位论文基因本体(GO)的富集分析和pathway分析等生物信息学技术，探讨lncRNAs／mRNA共表达基因在角膜新生血管发生的作用机制及可能的病理途经：根据芯片检测结果，筛选了20个差异表达显著的incRNAs，对两组角膜样本用RealTimePCR验证芯片检测结果，同时检测了抗血管生成因子(PDGF和endostadin)和促血管生成因子(VEGF及iNOS)的表达，分析这些相关的lncRNAs的表达规律。分别选取差异表达最显著的上调、下调lncR

7、NAs作为研究靶点，临床采集角膜炎、化学伤、外伤患者的角膜样本，采用RealTime—PCR，对筛选出的角膜新生血管相关的靶点lncRNAs进行表达分析验证，同时检测样本促血管生长因子(VEGF，Ang一2，MMP一9)和抗血管生长因子(PDGF)的表达，并与上述两条靶点lncRNAs的表达趋势进行比较，分析这两条相关incRNAs的表达规律。利用人脐静脉内皮细胞株(HUVEC)，通过设置空白对照组、h202组、H20：+ScrsiRNA组和H。0z+NR一033585siRNA组，分别进行Hoechst33342染色、JC—l染色、PI染色和Ki6

8、7检测，判断在氧化应激状态下，人同源lncRNAsNR033585对(HUVEC)活力、增殖的影响，在分子水