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时间:2018-12-09
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1、金樱子多糖的分离纯化及药理作用研究进展关键词:金樱子;多糖;分离;纯化;提取;药理中药金樱子为蔷薇科蔷薇属的传统药食两用野生植物金樱子(RosalaevigataMichx)的果实,始载于《蜀木草》,乂名刺榆子、刺梨子、金罂子、山石榴、糖罐子等,我国分布广泛、资源丰富。《本草纲目》中记载金樱子:性酸、涩、平、无毒;主治脾泻下痢、止小便利、涩精气;久服,令人耐寒轻身,补血益精,有奇效⑴。现代研究表明,金樱子具有调节免疫、降糖降脂、抗炎抗菌等药理作用⑵,其有效成分主要为黃酮、三话、乌索酸、齐墩果酸、多糖等⑶。木文就金樱子多糖的分离纯化以及药理作用进行综述。1金樱子多糖的提取金樱子多糖为白色粉
2、末,不溶于正丁醇、丙酮等有机溶剂,由葡萄糖、甘露糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖组成⑷,果实中总糖含量约24%,多糖含量达13.73%⑸。多糖分子结构中梵基较多、极性大,因此通常采用不同温度的水、稀碱溶液或稀酸溶液提取,常用的方法有:溶剂法、微波法和酶法。1.1溶剂法为植物多糖提取的常用方法。多糖极性大,根据相似相溶原则,可采用水等强极性溶剂提取。由于采用碱或稀酸水溶液提取多糖,容易破坏糖昔键及水解多糖链上的基团如硫酸酯基、磷酸酯基等,因此金樱子多糖提取的溶剂法常采用水提醇沉法。王瑞兰等⑹将金樱子干燥,粉碎,用无水乙醇与无水乙瞇混合液(体积比为1:1)浸泡12h去脂,布氏漏斗抽滤,滤渣
3、风干后用80°C左右热水浸提3次,每次5h,合并提取液,浓缩,用sevag法脱蛋白,出02脱色,透析,旋转蒸发浓缩,加人4倍体积的95%的乙醇沉淀过夜,离心,沉淀物连续用无水乙醇和丙酮洗涤,冷冻干燥得近似金黄色金樱子粗多糖。1.2微波法微波是频率介于300MHz-300GHz之间的电磁波,微波提取的原理是微射线辐射于溶剂并透过细胞壁到达细胞内部。由于溶剂及细胞液吸收微波能,细胞内部温度升高,压力增大,当压力超过细胞壁的承受能力时,细胞壁破裂,位于细胞内部的有效成份从细胞中释放岀来,传递转移到溶剂周围被溶剂溶解。此法提取时间短,提取率高。薛梅等⑺使用石油瞇脱脂后,辅以微波,用乙醇提取金樱子
4、黄酮,去黄酮后挥干剩余物的乙醇,继辅以微波,水回流提取、浓缩,得金樱子多糖。1.3其他提取法植物多糖还有多种尚未用于金樱子多糖的提取方法。如酶法、超滤法、超声法。以上方法各有优势,酶技术是近年来广泛应用的一项生物技术,在多糖的提取过程中,使用酶可降低提取条件,比较温和的分解植物组织,加速多糖的释放或提取;超滤法所采用的超滤膜能够从水中分离出多糖分子,具有浓缩条件温和,多糖损失小,速度快,节约能源,浓缩的同时可除去小分子杂质和色素等优点;超声法是应用超声波强化提取植物多糖的方法,具有缩短提取时间,提高提取率等优点,目前已应用于南瓜总糖、述原糖和多糖、海带多糖、廿草多糖、海藻多糖的提取。2金
5、樱子多糖的纯化多糖中常含有无机盐、大分子蛋白质、木质素、色素及醇不溶物的小分子有机物,提取过程中常用使用Sevag法,三氟三氯乙烷法,三氯乙酸法,酶法,等电点沉淀法去除杂质冋。此外,通过上述方法所得到的是多糖混合物,如果要得到单一的多糖,还必须对该混合物进行纯化。常用的纯化方法有:分级沉淀法,季鞍盐沉淀法,层析法,盐析法等阿。柱层析在多糖的纯化中较为常用,常分为两类:一是只有分子筛作用的凝胶柱层析,它根据多糖分子的大小和形状不同而达到分离目的,常用的凝胶有葡聚糖凝胶及琼脂糖凝胶,以及性能更佳的Sephacryl等。洗脱剂为各种浓度的盐溶液及缓冲液,其离子强度不应低于0.02mol/L。二
6、是离子交换层析,它不仅根据分子极性的不同,同时也具有分子筛的作用,常用的交换剂有DEAE-纤维素、DEAE-葡聚糖和DEAE-琼脂糖等,此法适合于分离各种酸性,中性多糖和粘多糖。多糖的纯化还可用其他方法,如制备性高效液相层析、制备性区带电泳,亲和层析等,这些方法适用于制备少量纯品供分析用。多糖的检测可用比旋度、示差折射及紫外检测等方法,也可以用苯酚一硫酸法测定多糖。纯度的鉴定可以用超离心法、高压电泳法、凝胶过滤法、高效液相法、示差折射法、紫外检测法等。王瑞兰等⑹制备性高效液相层析分离纯化金樱子多糖,其方法是:通过DEAE-SepharoseFastFlow柱层析,盐梯度洗脱,用苯酚一硫酸
7、法检测。收集到2个洗脱曲线主峰的多糖组分,经检测分子量分别为22712和16051,其中之一由D■半乳糖、D■甘露糖和木糖组成。3金樱子多糖的药理作用植物多糖与免疫功能的调节、细胞与细胞的识别、细胞间物质的运输、癌症的诊断与治疗等有着密切的关系。此外它还能控制细胞的分裂和分化,调节细胞的生长和衰老等⑼。日前,对多糖的化学研究以及生物功能的研究方兴未艾,不同来源多糖的潜在功能尚须进一步研究。专家预测,随着对多糖结构和功能关系的研究,将
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