烧烫伤药膏无菌检查方法的建立

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1、烧烫伤药膏无菌检查方法的建立杨铮欧阳丽影杨利红(通讯作者)(黑尤江省盘晶药晶检验检测所黑龙汀.哈尔i宾150001)【摘要】目的建立烧烫伤药膏的无菌检查方法。方法按照《中国药典》2010年版附录的要求，采用薄膜过滤法进行无菌检查，冲洗液用量为每筒300ml，通过接种7株阳性代表菌进行方法学验证。结果7株阳性代表菌株在试验组与阳性对照组均生长良好。结论木法可消除烧烫伤药膏的抑菌作用，适用于该制剂的无菌检查。【关键词】烧烫伤药膏无菌检查方法学验证【中图分类号】R446【文献标识码】B【文章编号】2095-1752(2013)09-0304-01烧烫伤药膏对革兰阳性菌及革兰阴性菌均只有抑制

2、作用，用于烧伤、烫伤、疮伤及碰伤等症状，是临床常用药物。为有效防止药品中的微生物直接进入体内，对机体造成损害，引发进一步的问题，为了使制剂临床应用能具有更好的安全性，因此，应对烧烫伤药膏进行无菌检查。根据《中国药典》2010年版［1】附录无菌检查的新要求及烧伤患者极易感染铜绿假单胞菌的临床现象，对烧烫伤药膏进行了无菌检查的方法学验证并在2010年版［1］附录无菌检查要求的基础上增加了铜绿假单胞菌。1材料1.1培养基与试剂硫乙醇酸盐流体培养基、改良马丁培养基、蛋白胨、肉汤培养基、PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、无菌十四烷酸异丙酯、聚山梨酯80。1.2菌种金黄色葡萄球菌［CMCC(B

3、)26003］、铜绿假单胞菌［CMCC(B)10104］、大肠埃希菌［CMCC(B)44102］、枯草芽孢杆菌［CMCC(B)63501］、生孢梭菌［CMCC(B)64941］、白色念珠菌［CMCC(F}98001］、黑曲霉［CMCC(F)98003］。1.3样品烧烫伤膏（佳木斯烧伤专科医院，批号：20090906、20091006、20091106,规格：50g/盒）2方法与结果2.1菌液制备取经30〜35°C培养18〜24小吋的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌与枯草芽孢杆菌营养肉汤培养物各1ml、取经23〜28°C培养24〜48小吋的白色念珠菌的改良马丁液体培养物1ml、

4、30〜35°C培养18〜24小吋的生孢梭菌的硫乙醇酸盐液体培养物1ml,分别加入0.9%无菌氯化钠溶液9ml中10倍依次稀释至浓度约为10〜100cfu/ml;取经培养5〜7天的黑曲霉改良马丁琼脂斜面培养物，加入含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液5ml,将孢子洗下，摇匀，吸取lml至无菌试管中，用含0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液10倍稀释至浓度约为10〜lOOcfu/ml,备用。2.2样品溶液制备取本品10盒，每盒以无菌操作方式称取lg,加至含20ml无菌十四烷酸异丙酯和无菌玻璃珠的容器中，充分振摇使供试品溶解，然后加入45°

5、C的pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml,振摇5〜10分钟，萃取，静置，使油水明显分层，取其水层作为1:10供试液。2.2方法验证-薄膜过滤法2.2.1试验组：取1:10供试液70ml,转移至适量的0.1%无菌蛋白胨水溶液中，摇匀，分别置7个滤简过滤（每筒含1:10供试液10ml）,冲洗液用量为每简300ml,分次冲洗并在最后一次冲洗液中分别加入lml已制备好的上述7株菌菌液，再加入相应的培养基100ml,按规定条件培养3〜5天，逐日观察。2.2.2菌液组：另取7个滤筒，加入相应的等量培养基，分别加入lml各试验菌，按规定条件培养3〜5天，逐日观察。2.2.3供试品对照组：取

6、1:10供试液20ml,转移至适量的0.1%无菌蛋白胨水溶液中，摇匀，置2个滤简中过滤（每筒含1:10供试液10ml）,冲洗液用量为每简300ml，再分别加入硫乙醇酸盐流体培养基和改良马丁培养基各100ml,按规定条件培养3〜5天，逐日观察。2.2.4阴性对照组：取试验用0.1%无菌蛋白胨水溶液300ml,分置两个滤简中过滤，再分别加入硫乙醇酸盐培养基和改良马丁培养基，按规定条件培养3〜5天，逐日观察。表1试验组与阳性对照组微生物生长情况“+”表示微生物生长良好，“一”表示无微生物生长。2.4讨论人体皮肤上寄生着许多微生物，在一定条件下可成为致病微生物对人体造成危害。此外，外界环境中

7、也存在着多种致病微生物。正常皮肤对此有多方面的防御能力。皮肤屏障的完整性受到较大的损害，因此对于外界环境的抵抗情况较差，易受外界微生物的侵袭。为此，在外用治疗此类感染吋，需要药品保持无菌状态［3】。《中国药典》2010年版规定，用于烧伤或严重创伤的软膏剂与乳膏剂应符合无菌检査法规定，更加严格地控制了样品质量［1】。2010年版《中国药典》无菌检查法方法学验证己用大肠埃希菌代替铜绿假申胞菌，但根据药品的给药途径及其抑菌作用，试验中特增加铜绿假单胞菌，以确保方