天花粉蛋白抑制hela细胞增殖的实验研究论文

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1、天花粉蛋白抑制HeLa细胞增殖的实验研究论文黄益玲，黄利鸣，惠燕，鲁华【关键词】天花粉蛋白；,,HeLa细胞；,,细胞凋亡摘要：目的研究天花粉蛋白(TCS)对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用,探讨TCS抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法检测TCS对Hela细胞的抑制作用，形态学观察、DNA电泳及流式细胞仪检测TCS对HeLa细胞的诱导凋亡作用。结果TCS对HeLa细胞的生长具有明显的抑制作用，显微镜下可见细胞圆缩，胞浆凝聚等凋亡细胞的形态学改变，DNA凝胶电泳呈梯级格局.freelentalStudyofTrichosanthin'sEffectonHelaCell

2、sProliferationAbstract：ObjectiveTostudytheinhibitoryeffectoftrichosanthin(Tcs)onHelacellsanditsanti-tumormechanism.MethodsTheantiproliferativeeffectofTCSonHelacellseasuredicroscopyorphologychanges,DNAagaroseelectrophoresisandFCManalysisinetheinducedapoptosis.ResultsTheproliferationofHeL

3、acellseshrinkage,chromatincondensation;theoccurrenceofDNAladderandapoptosisrateofHelacellsedependent.ConclusionTrichosanthincaninhibittheproliferationofHelacellsbyitsinductionofapoptosis.Key）的块根中提取出来的一种单链核糖体失活蛋白(ribosome-inactivatingprotein,RIP)，具有多种生物学效应，主要包括免疫调节、抗肿瘤、抗病毒等作用［1］。目前，TCS的抗

4、肿瘤研究主要集中在绒毛膜上皮癌、胃肠道肿瘤和白血病等方面［2～3］。本实验研究TCS对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用，并从诱导细胞凋亡的角度探讨其抗癌作用，为药物的进一步研究开发提供实验依据。1材料与方法1.1试剂MEM培养基和胎牛血清（FBS）购自美国GIBCOBRL公司，碘化丙啶（PropidiumIodide，PI）及RNaseA(RNA酶)为Simga公司产品，噻唑蓝(MTT)购自Amresco公司。二甲基亚砜(DMSO)购自Fluka公司，TCS购自上海金山制药厂（纯品，规格为1.2mg/ml）。1.2细胞培养人宫颈癌HeLa细胞为本室传代保存,培养于5

5、%CO2，37℃湿化孵箱中。培养基MEM含10%FBS，0.1U/L青霉素，0.1U/L链霉素，取对数生长期细胞待用。1.3细胞生长抑制实验采用噻唑蓝(MTT)还原法进行检测:将Hela细胞接种于96孔细胞培养板内(每孔的细胞数为2×104个)，细胞贴壁后对照组换新鲜培养基，实验组换用含有不同浓度TCS的培养基，置CO2培养箱内分别培养24，48，72h，去上清，加入MTT溶液200μl/孔，置CO2培养箱内培养4h，去上清，每孔加入200μlDMSO，轻度振荡后，测定570nm处光吸收值。取8孔吸收值平均数，按公式细胞抑制率(%)=(1-实验组平均吸光度值/对照组平

6、均吸光度值)×100%计算药物对细胞生长的抑制作用。1.4细胞凋亡的检测1.4.1细胞形态学观察将处于指数生长期的Hela细胞以不同浓度的TCS处理后，倒置显微镜下观察Hela细胞的形态改变。1.4.2DNA琼脂糖凝胶电泳胰蛋白酶消化收获实验组及对照细胞,1000r/min离心5min,.freelin离心15min，弃上清，用冰冷的70％乙醇漂洗，1.2%琼脂糖凝胶30V电泳3～5h，紫外观察拍照。1.4.3流式细胞仪检测分别离心收集对照组及实验组细胞，以含0.2%FBS的PBS清洗后加入75%冰冷的乙醇固定,在10000r/min条件下离心5min，去乙醇，PBS

7、洗涤两次，弃上清；用0.5mlPBS重悬，加入等体积的细胞裂解缓冲液室温作用5min，加RnaseA(终浓度30μg/ml)置37℃水浴中消化30min，离心后再加人1m1PI染色(终浓度50μg/ml)避光染色30min，以300目尼龙网滤过，上流式细胞仪检测，Multicycles软件分析结果。1.5数据统计分析用SPSS10.0forl的天花粉蛋白分别作用于Hela细胞后，随着作用时间的延长，细胞的生长抑制率逐渐升高,且抑制率随药物浓度增加而上升,呈一定的剂量、时效依赖性。结果见图1。图1TCS对Hela细胞作用的时间-剂量曲线（略）2.2He