人A549肺腺癌始动细胞的富集和鉴定﹡.doc

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1、人A549肺腺癌始动细胞的富集和鉴定﹡林盛，张振华，饶明月，吴敬波△（泸州医学院附属医院肿瘤科，646000）摘要:目的利用紫杉醇联合无血清培养完成对A549肺腺癌始动细胞的富集并鉴定富集亚群的干细胞特性。方法对数生长期的A549细胞经胰酶消化，干细胞培养基重悬，得到成球状生长的细胞；传至第二代时加入紫杉醇作用48h，离心去除死细胞和紫杉醇，换新鲜干细胞培养基培养，至存活细胞恢复克隆生长后鉴定其干细胞相关特性。结果用紫杉醇联合无血清培养方式法成功从A549细胞中富集得到肿瘤干细胞，该群的细胞高表达CD133/CD326分子及干细胞相关基因，具有多向分化潜能，高表达干细胞相关基

2、因及和更强的致瘤能力，具备干细胞相关特性。结论紫杉醇联合无血清培养富集得到高表达CD133/CD326分子的细胞亚群，该亚群具备干细胞相关特性，可用于后续肺腺癌干细胞生物学特性的研究。关键词:肿瘤始动细胞；A549;紫杉醇EnrichmentandidentificationoflungadenocarcinomainitiatingcellsfromA549﹡LINSheng,ZHANGZhen-hua,RAOMing-yue,WUJing-bo△(OncologyDepartment,AffiliatedHospitalofLuzhouMedicalCollege,Sic

3、huan646000,China)Abstract:ObjectiveToobtainthelungadenocarcinomainitiatingcellsfromtheA549celllinebasedonpaclitaxeltreatmentcombinationwithserum-freecultivationandtovalidatesparedcellscanrepresenttumorinitiatingcells(TICs).MethodsAfterdissociatedbytrypsogen,about106/mlcellsweresuspendedinse

4、rum-freemediumsupplementedwith0.4%BSA,insulin,basicfibroblastgrowthfactor(bFGF),humanrecombinantepidermalgrowthfactor(EGF)andobtainedspheroidcells.Atthesecondpassage,paclitaxelwasaddedataconcentrationof100nmol/Lfor48handthenreplacedwithcompletelyfreshmediumonceortwiceperweekuntilnewspheroid

5、semerged.ResultsThesubpopulationofcellsthatsurvivedserum-freecultivationandpaclitaxeltreatmentcouldhighlyexpresstheCD133/CD326molecularmarkersandhavefeaturesofstemnessincludingdifferentiation,highexpressionofCSCs-associatedgenesandstrongercapabilityoftumorigenesis.ConclusionsThesurvivedsubp

6、opulationthathighlyexpresstheCD133/CD326molecularmarkerspresentingthecharacteristicsofstemnessinvitroandinvivo,andcouldbeusedinfuture＊基金项目：国家自然科学基金资助项目（81201682）。△通讯作者，Email:wjb6147@163.comresearchesofbiologicalfunctions.Keywords:tumorinitiatingcells;A549;paclitaxel非小细胞肺癌（NSCLC）是重要的恶性肿瘤致死原因

7、。近十年以来，随着诊断水平的提高和综合治疗模式（新辅助化疗，高精度放疗以及分子靶向治疗）的改进，使肺癌病员有所受益，但总5年生存率改善并不明显。大量的研究证实，在肿瘤组织中存在为数极少数的细胞（肿瘤始动细胞或癌干细胞）：，其具备始动肿瘤发生、维持自我更新、治疗放化疗抗拒、等特点，有更强的侵袭和致瘤能力，是肿瘤复发和转移的根源。从肿瘤干细胞层面进行研究将有利于阐明肺癌的发生、发展机制，发现新的临床诊疗靶点以达到提高疗效之目的。本研究中，我们采用紫杉醇联合无血清逆向诱导的方法从A549细胞株中富集肺腺癌始动