紫外分光光度法测定唐松草中皂苷的含量

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1、紫外分光光度法测定唐松草中皂苷的含量【关键词】皂苷；,,唐松草；,,紫外分光光度法　　摘要：目的探讨唐松草中齐墩果烷型皂苷的含量，为用药提供科学依据。方法根据皂苷与浓硫酸作用后在530nm产生特征吸收峰，对唐松草中皂苷的含量用比色法测定。结果被测的唐松草植物根和茎叶中均含有齐墩果烷型皂苷。结论紫外分光光度法测定唐松草中皂苷的含量平均回收率为98.8%，精密度较高，测试方法简便可行。　　关键词：皂苷；唐松草；紫外分光光度法　　毛茛科唐松草属植物在部分民族民间药用广泛，全世界约有200种，在我国至少有30种该属植物在15个民族药用，是藏药、蒙药等众多民族药用的重要组成部分［1］。唐松草属植物因其形

2、似马尾，功似黄连，故名马尾黄连或马尾连。马尾连始载于《本草纲目拾遗》：“性寒而不峻，为苦而稍减，不似川连之厚，性能去皮里膜外及经络之邪热，小儿伤风及痘科用”。现代研究表明，唐松草属植物除含有苄基异喹啉生物碱外，还含有皂苷类成分［2］。唐松草中的皂苷类成分含有三类：羊毛脂甾烷(lanostane)型、齐墩果烷型和环菠萝蜜烷(cycloartane)型［2］，其中齐墩果烷型，如foetosideC研究发现具有抗肿瘤活性。为了深入挖掘和开发唐松草属植物活性成分及相关功能基因，揭示其生物合成代谢分子机理，本文采用紫外分光光度法测定唐松草属植物齐墩果烷型皂苷进行分析研究，为以后相关研究工作的深入开展奠定

3、基础。　　1材料　　1.1仪器SHIMADZUUV2450紫外分光光度仪，MILLIQ纯水机，BüCHI旋转蒸发仪，DK8D型电热恒温水槽，SartoriusCP224S电子天平，感量为0.1mg。　　1.2药材经刘毅副教授鉴定为毛茛科植物短梗箭头唐松草Thalictrumsimplexvar.hypoleucum，爪哇唐松草T.javanicmBl.，小果唐松草T.microgynumLecoyexOliv.的干燥全草。　　1.3试剂甲醇、正丁醇、石油醚、香草醛、无水乙醇、硫酸均为分析纯；齐墩果酸对照品购于中国药品生物制品检定所。　　2方法　　2.1测定波长的选择精密吸取齐墩果酸标准品溶液（

4、1mg/ml）50μl，置于试管中，分别精密加入8%香草醛乙醇溶液0.5ml，72%浓硫酸（v/v）5ml，摇匀后于恒温水浴60℃加热10min，取出试管置冰水浴中冷却15min。随行溶剂作空白，在430～700nm范围内进行光谱扫描，结果齐墩果酸在530nm波长处有最大吸收，故选择530nm为测定波长。　　2.2标准曲线的制备精确称取齐墩果酸10mg，置于10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成浓度为1mg/ml齐墩果酸标准溶液。精密量取齐墩果酸标准品溶液20，40，60，80，100μl，分别置于具塞比色管中，挥去甲醇，冷却，加入新鲜配制的8%香草醛-乙醇溶液0.5ml，72%硫酸溶

5、液5.0ml（置冰水浴中混合），摇匀，盖塞，于60℃水浴上加热10min，立即冷却，摇匀，随行溶剂作空白，在530nm处测定其吸收度，标准曲线为Y＝2.48X+0.069，r=0.9965。结果呈现良好的线性关系。　　2.3供试品溶液的制备精密称取样品适量，置于25ml烧瓶中，精密吸取甲醇25ml，称重，超声30min，冷至室温，补重，过滤，水浴蒸干后加水20ml溶解。以石油醚40ml，脱脂2次，合并石油醚液并用10ml水洗涤，弃去醚层，将洗液与水层合并，用水饱合的正丁醇萃取3次,30ml/次。合并萃取液，用20ml正丁醇饱合水洗涤，挥去正丁醇后用甲醇溶解并定容至25ml容量瓶中，摇匀，备用。

6、　　2.4精密度测定精密吸取同一供试溶液5份，进行含量测定，结果RSD为1.20％。　　2.5重现性实验精密吸取5份供试溶液，进行含量测定，结果RSD为2.85％。　　2.6稳定性实验精密吸取1份供试溶液，分别于0，5，10，15，20，30min测定吸光度，结果RSD为3.53％，表明30min内显色稳定。　　2.7含量测定吸取适量供试液置于具塞试管中，按“标准曲线绘制”项下的操作测定吸光度。结果见表1。　　表1唐松草中总皂苷的含量（略）　　“”表示未检测到吸收峰；n=3　　2.8加样回收实验精密称取唐松草适量5份，定量加入对照品齐墩果酸，制成供试品液，并按“标准曲线绘制”项下的操作测定吸光

7、度。结果见表2。　　表2加样回收率实验结果（略）　　3讨论　　　　唐松草中根及茎叶中均含有齐墩果烷型皂苷。我们对不同种唐松草中的齐墩果烷型皂苷的含量进行了比较，结果显示，短梗箭头唐松草中齐墩果烷型皂苷的含量明显高于其他两种唐松草中皂苷的含量，原因可能是由采收的不同品种唐松草药材生长年限的差异引起的。我们采收的短梗箭头唐松草为多年生草本，而其他两种均为一年生草本。对于唐松草生长年限与其皂苷含量高低的