呋塞米注射液中细菌内毒素检查方法的研究

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1、呋塞米注射液中细菌内毒素检查方法的研究【摘要】目的寻求使用鲎试剂检测呋塞米注射液中细菌内毒素的方法。方法按照《中国药典》2005年版二部收载的细菌内毒素检查方法进行试验。结果当样品作25倍稀释时，呋塞米注射液对鲎试剂的凝集反应未见干扰作用，测试结果均符合规定。结论可以用细菌内毒素检查法来控制呋塞米注射液的质量。【关键词】呋塞米注射液鲎试剂细菌内毒素呋塞米注射液（furosemideinjection,FI）为强效利尿药，临床上主要用于水肿性疾病，包括充血性心力衰竭、肝硬化、肾脏疾病（肾炎和肾病及各种原因所致的急、慢性肾功能衰竭，尤其是应用其他利尿药效果不佳时，应用本类药物仍可有效），另可用于高

2、血压、预防急性肾功能衰竭、高钾血症及高钙血症等。成人每次最大用量为4mg/（kg·h）【1】。FI一般为静脉给药，而现行标准【2】未对其细菌内毒素采取质量控制措施，故本文初步建立了FI的细菌内毒素检查法，用于FI中细菌内毒素的控制。现总结如下。1实验材料呋塞米注射液规格2ml:20mg，批号0701221、0704111、0704121（市售品、为同一公司产品，经全检均符合规定）。细菌内毒素工作标准品，批号2007-5，效价100EU/支（中国药品生物制品检定所）。鲎试剂（TAL）批号0705250、灵敏度（λ）为0.25EU/ml（湛江安度斯生物有限公司,经灵敏度复核符合规定）；细菌内毒素检

3、查用水（BET水）批号0612280，内毒素含量≤0.015EU/ml（湛江安度斯生物有限公司）。2方法与结果2.1FI的细菌内毒素限值的计算【2】根据公式L=K/M，M为静脉给药，最大剂量为4mg/（kg·h），K为5EU/（kg·h），因此FI的细菌内毒素限值L=1.25EU/mg。2.2FI最大有效稀释倍数（MVD）的确定【2】FI的限值L=1.25EU/mg，由于样品的规格为2ml:20mg，因此FI的限值也即为L=12.5EU/ml，所以对应于市售常用灵敏度（λ）0.5～0.03EU/ml的TAL，按照公式MVD=cL/λ计算，供试品可选择的稀释倍数分别25、50、100、200、4

4、00倍。2.3干扰试验预试验为了解供试品本身对TAL与细菌内毒素凝胶反应可能存在的干扰情况，选择一批经全检合格的FI用BET水做25、50、100、200、400倍稀释。用此系列溶液作为溶剂溶解并稀释内毒素，使每个稀释度中内毒素的含量均为2λ，用灵敏度为0.25EU/ml的TAL进行试验，同时用供试品液阴性对照，结果见表1。结果表明供试品在当被稀释25～400倍时对细菌内毒素试验基本无干扰，可以做进一步的干扰试验。表1FI干扰试验预试验结果（样品批号0701221，TAL批号0705250，λ=0.25EU/ml）2.4干扰试验为了进一步证实FI对TAL的凝胶化反应是否有干扰作用，分别用BET

5、水及上述稀释倍数为50倍（对应于λ为0.25EU/ml的TAL）的溶液作溶剂，将细菌内毒素工作标准品稀释成0.5、0.25、0.125、0.0625EU/ml的稀释液，与λ为0.25EU/ml的TAL进行反应，结果见表2。TAL在BET水和3个批号供试品中的λ值均在0.5～2.0λ范围内，符合中国药典对细菌内毒素检查有效性的规定。表2FI的干扰试验结果（TAL批号0705250,λ=0.25EU/ml）2.5供试品的细菌内毒素检查FI的L值为12.5EU/ml,根据干扰试验结果，将FI先用BET水做50倍稀释，与λ为0.25EU/ml的TAL进行试验，结果见3。从表3可以看出，供试品阳性管和阳

6、性对照管均呈阳性，供试品和阴性对照管均呈阴性，试验结果成立，3个批号供试品的细菌内毒素检查均符合规定。表3FI的细菌内毒素检查结果（TAL批号0705250，λ=0.25EU/ml）3小结试验表明FI在被稀释25～400倍时（即其样品浓度为0.4～0.025mg/ml），对鲎试剂的凝胶化反应未见干扰作用，用细菌内毒素检查法来控制其质量是可行的。因FI是静脉给药，所以在其质量标准中增加细菌内毒素检查项目是有必要的。FI的细菌内毒素限度L值为每1mg呋塞米中含细菌内毒素的量应小于1.25EU。具体检验时，将FI用BET水进行25倍稀释（0.4mg/ml）或更大倍数的稀释，选用λ为0.5EU/ml或

7、灵敏度更高的TAL对其细菌内毒素限度进行检查，该法简便、快速。【