钬激光对兔肾vx2肿瘤的毁损效应

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1、钬激光对兔肾VX2肿瘤的毁损效应作者：石维佳，保庭毅，杨增悦，邱建新，薛力，孙文美【摘要】目的：探讨钬激光(Ho:YAGlaser)对肾肿瘤的毁损效应.方法：制作兔的肾VX2肿瘤模型，在手术直视下采用不同钬激光功率对肿瘤组织进行彻底照射.观察照射后肿瘤组织及周边肾脏组织的病理变化，另外每组各5只于照射2m3.结论:钬激光对兔的肾VX2肿瘤组织有明显杀伤作用，且有较好的可控性和操作性.【关键词】钬激光　　0引言　　钬激光是由掺钬的钇铝石榴石激光器(Ho：YAG)产生的中红外激光，因其具有良好的物理特性及生物学效应，目前已在临床上得到了广泛的应用［

2、1-5］，然而尚无应用钬激光治疗肾肿瘤的研究报道.我们拟通过动物实验研究钬激光对肾肿瘤的毁损效应.　　1材料和方法　　1.1材料成年健康新西兰白兔30只，雌雄不限，体质量2.0～2.5kg,4～5mo龄(第四军医大学实验动物中心).VX2瘤株种类为VX2鳞状细胞癌(第四军医大学唐都医院实验外科).HE染色系列试剂(第四军医大学病理教研室).速眠新Ⅱ注射液（长春军需大学兽医研究所）.磷酸盐缓冲液(PBS)和40g/L多聚甲醛磷酸缓冲液(pH7.4APES).石蜡切片机(美国A0829)；HE染色机(日本樱花公司)光学显微镜BX60(日本Olym

3、pus公司)；IBAS2000型电子计算机图像分析系统(德国Opton公司)；VersaPulsePoLine550micronBlue(美国科医人公司)；JacketReusableFiber和Sequoia512型彩色超声诊断仪（美国Acuson公司）.　　1.2方法　　1.2.1动物模型的建立　　1.2.1.1接种用VX2瘤株的准备把冰冻的VX2瘤株组织块由液氮中取出，37℃水复苏，生理盐水冲洗，再用PBS液冲洗后切碎，300r/min离心约5min.用18G针头lmL注射器抽吸瘤种备用.将准备好的瘤种注射液注入兔的后腿外侧肌肉，2~3处

4、，依次剪开皮肤、皮下组织、肌肉及腹膜，暴露左肾，将肾脏轻轻挤出腹腔，将准备好的含肿瘤组织悬液的注射器从左肾下极进针，沿肾长轴在肾皮质内走行，边退针边将注射器中的肿瘤组织混悬液约0.5mL轻轻推入肾皮质内，针尖退出的同时，助手用无菌明胶海绵压迫止血并防止肿瘤组织溢出，然后将左肾放回原位，逐层缝合.术后肌注青霉素4×105U,4d.接种12d后行B超检查种植肿瘤生长情况，未发现肿瘤生长者视为接种失败.　　1.2.2分组及处理将接种成功的荷肾VX2肿瘤兔26只随机分为2组:①实验组：21只行钬激光肿瘤毁损实验.根据分组提取动物,速眠新Ⅱ注射液0.2～

5、0.4mL，兔臀部肌肉注射，麻醉满意后将兔右侧卧并固定于操作台上.应用脱毛剂对手术区域进行脱毛处理；碘酒、酒精消毒腹壁；在左肋缘下约2.3cm处做一长约8cm的切口，依次剪开皮肤、皮下组织、肌肉及腹膜，充分暴露并游离左侧肾脏，保持肾脏的良好血运；设置钬激光参数如下：脉冲能量（1.0J）、照射频率（40Hz），参数的选择依据为钬激光对正常肾实质的生物学效应［6］.将钬激光光纤头端插入18G针头，在直视下置入肿瘤包膜下约0.5mm深处.大致损毁肿瘤后退出；随机处死实验组中16只动物，解剖左肾，观察钬激光损毁灶大致形态，用钢尺测量损毁肿瘤，按公式π/

6、6长×宽×高计算损毁肿瘤体积［7］，记录对应之钬激光总功率.以损毁灶为中心，每隔1mm切取组织至肉眼观正常肾组织处，后置于40g/L甲醛固定、石蜡包埋、切片，进行HE染色;未被处死的5只荷瘤兔待肾脏止血后，逐层缝合腹膜、皮下组织及皮肤.术后青霉素4×105U,im,3d，2m深处.不接钬激光治疗仪，拔除针头待肾脏止血后关腹.术后青霉素4×105U,im,3d，2in内自行停止.无尿瘘发生.解剖肾脏可见靶区内中央灰白色鱼肉样肿瘤组织变为白色凝固性坏死灶，界限清楚，中间为汽化的缺损区，汽化区外为热损伤带.　　2.3组织学检查钬激光照射后，光学显微镜

7、下可见浅层为变性坏死带，肿瘤细胞形态消失、核固缩、碎裂、融解，照射范围足够可观察到深层为正常肾组织的充血瘀血带，肾静脉扩张、瘀血，可见较多的炎细胞浸润和小片状出血和血栓形成，肿瘤细胞少见，充血瘀血带与正常组织分界清楚(图1A,B).部分细胞核完全破裂,仅见胞质内核基质成分.电子计算机图像分析：全部病理切片经电子计算机图像分析显示，毁损灶外周热损伤带宽度均在400～800μm之间(540±33)μm，照射时间的长短对热损带宽度均无影响.汽化豁口两侧和底部的热缺损带宽度无差异.　　图1兔肾VX2肿瘤经钬激光照射后病理表现　略　　2.4钬激光损毁灶的

8、体积及相应钬激光总功率间的关系随着激光输出功率的增大肿瘤组织损伤灶亦增大.应用SPSS软件绘制散点图，进行直线相关及回归分析，表明两者之间有良好的相关