p糖蛋白在乳腺癌原发性耐药过程中的表达论文

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1、P糖蛋白在乳腺癌原发性耐药过程中的表达论文赵菲，姜军，范林军，杨新华，张毅【关键词】基因Pglycoproteinexpressioninthedevelopmentofprimarymultidrugresistanceinbreastcarcinoma【Abstract】AIM:TostudytheexpressionandsignificanceofPglycoprotein(Pgp)inthedevelopmentofmultidrugresistanceinbreastcancer.METHODS:TheexpressionofPgpandMDR1mR

2、NAmunohistochemistryandreversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR)inthespecimensfrom25breastcancerpatientsotherapy(NACgroup),15breastcancerpatientsotherapy(nonNACgroup)and10patientsRNAexpressionetumorcellstolerancestochemotherapeuticsincreaseduringtheprocessofoncogenesisandthe

3、tolerancescanbeinducedbyanextremelyloultidrugresistanceinbreastcarcinoma.【Keys【摘要】目的：研究乳腺癌原发性耐药过程中P糖蛋白（Pglycoprotein,Pgp）的表达特征，初步探讨乳腺癌原发性耐药的发生机制.方法：采用免疫组织化学及逆转录多聚酶链反应技术，对25例接受术前新辅助化疗的乳腺癌患者、15例未接受术前化疗的乳腺癌患者、10例乳腺腺病患者组织标本内Pgp和MDR1mRNA的表达情况进行检测.结果：Pgp表达阳性率在乳腺癌术前化疗组患者和未化疗组患者中分别为84.0%（21/

4、25）和46.7%（7/15），对照组未见Pgp表达；MDR1表达阳性率在三组则分别为84.0%（21/25）、53.3%（8/15）和10%（1/10）.freelRNA表达即可导致多药耐药，MDR1/Pgp与乳腺癌的内源性耐药相关.【关键词】P糖蛋白；基因，MDR；乳腺肿瘤0引言多药耐药（multidrugresistance,MDR）是肿瘤治疗失败的重要原因.目前对MDR的研究主要集中于肿瘤细胞在化疗药物诱导下所产生的获得性耐药，对内源性耐药机制的研究则尚欠深入.而在临床治疗中，若预先了解肿瘤细胞的内源性耐药状况，不仅可以避免因使用MDR型药物而导致的获得

5、性多药耐药，而且可以针对肿瘤的耐药特点使用逆转剂，提高化疗效果.我们通过免疫组化方法及RTPCR法检测P糖蛋白（Pglycoprotein,Pgp）及其编码基因MDR1（multidrugresistance1）在乳腺癌原发性耐药过程中的表达.1材料和方法1.1材料200302/200310住院女性乳腺癌患者接受术前化疗者25例（术前化疗组），未行术前化疗者15例（术前未化疗组），乳腺腺病手术患者10例（对照组）.3组患者年龄无显著差异，组间均衡性好.取材后标本直接置于液氮中冻存备用.采用福州迈新生物技术开发公司的免疫组化染色试剂盒与即用型抗PgpmAb.1.2

6、方法按说明书进行.Pgp以胞质和胞膜呈棕黄色着色为阳性，染色强度与阳性细胞的百分比乘积3分为免疫反应（+）.采用Roche公司的Tripure试剂提取组织总RNA.获得的RNA行琼脂糖凝胶电泳见清晰的28S,18SrRNA条带；紫外分光光度仪测定其260nm及280nm的A值比值1.65，证实样本无污染.RNA浓度=A260×37×500mg/L.RTPCR采用两步法，逆转录反应体系：5×缓冲液5.0μL，10mmol/LdNTP1.25μL，40MU/LRnasin0.625μL，200MU/LMMlV逆转录酶1.0μL，加DEPC去离子水至总体积25μL，P

7、CR仪上42℃逆转录60min,99℃5min灭活逆转录酶；PCR反应体系：逆转录产物10μL，10×缓冲液5.0μL，25mmol/LMgCl28μL，2.5mmol/LdNTP4μL，5MU/LTaq酶0.25μL，20μmol/L上下游引物各0.5μL，并设βactin为内参，加DEPC去离子水至总体积50μL.引物序列如下：MDR1：上游5′GTTGCCATTGACTGAAAGAAC3′，下游5′ACAGGAGATAGGCTGGTTTGA3′；βactin：上游5′CCAAGGCCAACCGCGAGAAGATGAC3′，下游5′AGGGTACATGGTG

8、GTGCCGCCAGA3