银屑病成纤维细胞培育上清对角质形成细胞增殖的影响

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1、银屑病成纤维细胞培育上清对角质形成细胞增殖的影响作者：赵小东，付萌，卢涛，孙林潮，廖文俊，王冬青，刘玉峰【摘要】目的探讨银屑病成纤维细胞对角质形成细胞增殖的作用。方法原代培养银屑病成纤维细胞、正常人成纤维细胞，无血清培养的角质形成细胞，四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测银屑病成纤维细胞、正常人成纤维细胞培养上清对角质形成细胞增殖的影响。结果银屑病成纤维细胞培养上清培养的角质形成细胞的增殖活性高于正常人成纤维细胞培养上清组和无血清培养的角质形成细胞。结论银屑病成纤维细胞可能通过释放某些可溶性细胞因子促进角质形成细胞的增殖，维持银屑病皮损表皮的过度增殖状态。【关键词】银屑病成纤维细胞角质形

2、成细胞增殖Effectsofculturedsupernatantoffibroblastfrompsoriaticlesionsonproliferationactivityofkeratinocytes【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheeffectsoffibroblastsinpsoriaticlesionsonproliferationactivityofkeratinocyte.MethodsFibroblastsinpsoriaticlesionsandnormalskinarilyculturedseperately.Keratinocy

3、tesinnormalskinfreemedium(KC-SFM).TheeffectsofculturedsupernatantoffibroblastfrompsoriaticlesionornormalskinonkeratinocytesinedbyMTTcolorimetricmethods.ResultsAsopposedtoculturedsupernatantsofnormalfibroblastsorKC-SFM，culturedsupernatantsoffibroblastsfrompsoriaticlesionsincreasedtheproliferativea

4、ctivityofkeratinocytessignificantly.ConclusionFibroblastsinpsoriaticlesionscanpromotetheproliferationofkeratinocytesandmaintainthehyperproliferativestateofpsoriaticepidermis，aybemediatedbysolublecytokinesreleasedbyfibroblasts.【Keya，USA)。完整的KC-SFM配制：KC-SFMl00ml加入EGF0.5μg及BPE5mg。成纤维细胞培养液配制：DMEM80ml

5、加入胎牛血清20ml。银屑病患者活检标本，健康成人包皮均来自西京医院门诊。1.2成纤维细胞培养取病理确诊的银屑病患者活检标本，0.25％洗必泰液消毒10min，无菌生理盐水漂洗3次，剪去皮下组织，0.25％Dispase消化4℃，16h。分离表皮，将真皮剪碎，0.25％胰蛋白酶室温消化15min，终止消化，自然沉降，收集上层细胞悬液后，重复消化收集。细胞悬液1200r／min离心洗涤2次，含10％胎牛血清DMEM重悬，调整细胞浓度为105／ml，接种于96孔培养板。37℃，5％CO2：孵育，隔日换液，至70％融合，收集换液后48h后的培养上清备用。取手术切除的健康成人包皮，以相同方法培养

6、正常人成纤维细胞，收集培养上清。1.3角质形成细胞培养取手术切除的健康儿童包皮，0.25％洗必泰液消毒10min，无菌生理盐水漂洗3次，剪去皮下组织，并剪成5mm×10mm［2］皮块，0.25％Dispase消化4℃，16h。分离表皮，表皮用0.02％EDTA和0.25％胰蛋白酶(1：1)室温消化10min，吸管吹打表皮，尼龙网过滤收集基底细胞，含10％胎牛血清DMEM，1000r／min离心洗涤2次，每次10min。用KC-SFM调整细胞浓度为105／ml，接种于96孔培养板。37℃，5％CO2孵育，隔日换液，至70％融合。每孔分别加入100μl银屑病和正常人成纤维细胞培养上清，再加入

7、100μl完整的KC-SFM，孵育72h，每组设3个复孔。1.4MTT法检测细胞代谢活性MTT法观察银屑病成纤维细胞、正常人成纤维细胞的生长曲线，每组设3个复孔；于培养的24h、48h、72h用MTT法检测正常人成纤维细胞培养上清和银屑病成纤维细胞培养上清处理的角质形成细胞的代谢活性(KC-SFM为阴性对照)；每孔分别加入20μlMTT溶液(浓度为5g／L，用PBS稀释)，孵育4h后吸除，二甲基亚砜显色10min，用酶联免疫检测仪以