龙胆药材提取工艺的正交实验设计法优选

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1、龙胆药材提取工艺的正交实验设计法优选曹悦，左代英，王维宁，刘敬武，孙启时【摘要】目的建立龙胆最佳提取工艺，为龙胆的种植和质量研究奠定基础。方法采用L9(34)正交表安排实验,确定最佳提取条件。色谱柱为ShimadzuC18(3.0mm×75mm,1.7μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸(V∶V=5.5∶94.5)，流速0.80ml/min;检测波长235，270nm;柱温为40℃。结果影响因素最大的是提取溶剂，其次是提取方法，最小的是提取时间。结论各因素较优的水平组合为A1B1C1，即甲醇超声提取30min。【关键词】龙胆;正交实验设计法;獐牙菜苦苷;龙胆苦苷　　Abstr

2、act：ObjectiveToestablishbestextractionprocessofGentianascabraBge.byUPLCsoastoprovidebasefortheplantandresearchofGentianascabraBge.MethodsByL9(34)orthogonaldesign,theoptimalconditionedasfolloadzuC18(3.0mm×75mm,1.7μm),Acetonitrile-0.1%Phosphorylation(V∶V=5.5∶94.5)asnl/min,detectionand270nman

3、dthecolumnetemperatureosteffectivefactor,thesecondethod，andthelaste.ConclusionThebestextractionprocessisA1B1C1:supersonicextractionfor30mininmethanol.　　Keyarin;Gentiopicroside　　龙胆为龙胆科植物条叶龙胆GentianamanshuricaKitag.，龙胆GentianascabraBge.，三花龙胆GentianatrifloraPall.或坚龙胆GentianarigescensFranch.的干

4、燥根及根茎[1]。具有清热燥湿、泻肝胆火的作用。我国主要分布于黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古等地。现代药理研究证明,龙胆苦苷具有显著的肝脏保护、抗炎、抗病原微生物、中枢兴奋及健胃利胆等作用,与中医对龙胆的应用基本上一致[2]。龙胆的主要有效成分为环烯醚萜类化合物，有龙胆苦苷(Gentiopicroside)、獐牙菜苦苷(Sarin)及獐牙菜苷(Sg/ml和0.3mg/ml的溶液。　　2.2色谱条件色谱柱为ShimadzuC18(3.0mm×75mm,1.7μm);流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(5.5∶94.5)，流速0.8ml/min，检测波长分别为235nm和270nm，柱

5、温40℃，进样量4μl。　　2.3实验因素与水平根据预实验结果,以提取溶剂、提取方法、提取时间3个因素，每个因数3个水平，采用L9(34)正交表安排实验。见表1。表1实验因素与水平　　2.4正交实验称取龙胆药材27份(药材来源于辽宁省龙胆药材GAP生产基地),按表2安排实验。以龙胆苦苷、獐牙菜苦苷的含量加和为指标,采用直观分析法、方差分析,确定最佳工艺条件。综合评分结果=獐牙菜苦苷含量+龙胆苦苷含量。表2正交实验方案及结果　　2.5极差分析与方差分析对表2数据分析，结果见表3～4。　表3直观分析结果表4方差分析　　由方差分析的结果，可以看出条件，A>B>C，结合

6、直观分析，确定最佳提取工艺为：A1>B1>C1，即甲醇超声提取30min。　　2.6獐牙菜苦苷和龙胆苦苷的测定按照上述的条件，取龙胆药材，测定。两个指标性成分，精密度实验：RSD分别为1.92%,0.32%(n=5);稳定性实验：16h内稳定性良好，峰面积RSD分别为1.65%,0.31%;重复性实验：RSD分别为0.79%,2.0%(n=6);回收率实验：獐牙菜苦苷的平均回收率102.09%，RSD为1.68%(n=6);龙胆苦苷的平均回收率103.80%，RSD为1.11%(n=6)。　　3讨论　　本实验采用的药材来源于辽宁省龙胆药材GAP生产基地，所考察的

7、指标将对品种的种植和采收期的确定有很大的指导意义。影响龙胆提取率的因素也很多，如溶剂类别、浓度、提取方法、提取时间、药材粉碎度、温度、提取次数等因素，但结合药材采收后的特点，我们选择了提取溶剂、提取方法、提取时间这3个较为关键的因素作为考察条件，每个因素3个水平，采用L9(34)正交表安排实验，制备样品溶液进行测定。　　UPLC超高效液相色谱仪是目前较为先进的色谱技术，它有出峰快、分离度高的特点，本品所测定的成分极性较大，出峰较晚，使用UPLC技术可以明显改善出峰时间。　　通过分析正交实验设计法的结果，我们发现在使