了哥王中西瑞香素提取工艺的正交实验设计优选

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1、了哥王中西瑞香素提取工艺的正交实验设计优选【关键词】了哥王；西瑞香素；正交设计；提取工艺　　了哥王学名南岭荛花ey，为瑞香科荛花属植物，其根、茎叶和果实均可入药，盛产于广东、浙江、广西等地。了哥王始载于《岭南采药录》，其性味苦寒，微辛，有毒，入肺肝经，具有清热解毒、消肿散结、通经利水等功效。了哥王主要有香豆素类、黄酮类、木脂素类、挥发油类、甾体类、皂苷等成分，文献报道具有抑菌、抗病毒、抗炎镇痛、止咳祛痰、抗癌等作用［1］。西瑞香素（daphnoretin）为香豆素类化合物，在了哥王中含量较大［2］，具有抗病毒［3］、抗肿瘤［4］等作用。了哥王中西瑞香素的提取，文献中采用

2、甲醇为提取溶剂，但甲醇毒性较大，且提取工艺未经优化［5，6］。本实验采用乙醇提取，通过正交实验考察了影响西瑞香素提取工艺的乙醇体积分数、提取时间、提取次数，优选了哥王中西瑞香素的最佳提取工艺，为工业化生产提供实验参考依据。　　1仪器试剂与药材　　1.1仪器岛津LC-6A高效液相色谱仪（日本SHIMADZU），ANASTAR色谱工作站（天津奥特塞恩斯仪器有限公司），分析天平（十万分之一，湘仪天平仪器厂），旋转蒸发器（RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂），SHZ-Ⅲ型循环水真空泵（郑州长城科工贸有限公司），KQ-100超声机（昆山市超声仪器有限公司），恒温水浴锅（天津市泰斯

3、特仪器有限公司）。　　1.2试药西瑞香素对照品（广州来普达克生物技术有限公司，纯度为98.9%），了哥王（购自河北安国市童铃药材有限公司，产地是广东，批号：080522）；甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限公司禹城化工厂），纯净水（杭州娃哈哈集团有限公司），无水乙醇、磷酸为分析纯；了哥王药材由沈阳药科大学孙启时教授鉴定为ey。　　2方法与结果　　2.1西瑞香素的含量测定　　　　2.1.1色谱条件与系统适用性试验色谱柱：DiamonsilC18(250mm×4.6mm,5μm)；流动相：甲醇-0.05%磷酸水溶液(49∶51，V/V)；流速1.0ml·min-1；检测波长：3

4、45nm；柱温：40℃。在上述色谱条件下，理论板数按西瑞香素计不低于3000。西瑞香素与相邻峰的分离度均大于1.5，拖尾因子均在0.95～1.05之间。色谱图见图1。　　2.1.2对照品溶液的制备　　取西瑞香素对照品约5.0mg，精密称定，置于100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得50.0μg·ml-1储备液。　　2.1.3供试品溶液的制备取了哥王药材约10g，精密称定，置于圆底烧瓶内，加75%乙醇浸泡过夜，药材∶溶剂=1∶10，次日于80°水浴中回流提取4次，2h/次，热滤，合并滤液，减压蒸干，所得浸膏用甲醇溶解并转移至100ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，

5、摇匀，精密吸取1ml于50ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤，取续滤液即得。　　2.1.4标准曲线绘制依次精密吸取西瑞香素标准储备液0.4，0.8，1.6，2.4，3.2，4.0ml，分别置于10ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成西瑞香素浓度分别为2.0，4.0，8.0，12.0，16.0，20.0μg·ml-1的系列标准溶液。吸取20μl上述溶液依次注入高效液相色谱仪中，于345nm波长处测定峰面积。以西瑞香素标准溶液的浓度(μg·ml-1)为横坐标(X)，峰面积(A)为纵坐标(Y)，进行线性回归。所得回归方程为Y=6.183×104X+5.492

6、×103，r=0.9999(n=6)。结果表明，西瑞香素在2.0～20.0μg·ml-1范围内呈良好的线性关系。　　　2.1.5精密度实验　　取同一对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样6次，20μl/次。测定西瑞香素峰面积，其RSD为1.1%，表明该方法的精密度良好。　　2.1.6稳定性实验　　取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8，16，24h按上述色谱条件，进样20μl测定西瑞香素峰面积，RSD为1.6%，表明西瑞香素在24h内稳定。　　2.1.7重复性实验　　精密称取了哥王药材6份，按“2.1.3”项下方法制备并测定，RSD为1.7%，表明此方法的重复性良好。　　

7、2.1.8加样回收率实验　　称取已知含量的了哥王药材6份，每份约5g，精密称定，分别定量加入西瑞香素对照品约20mg，按“2.1.3”项下方法操作，计算回收率。平均回收率为98.3%，RSD为1.7%。　　2.2.2实验方法及结果　　称取了哥王药材9份，每份约10g，精密称定，按表2的设计浸泡过夜后回流提取，热滤，合并滤液，减压浓缩至干，所得浸膏用甲醇溶解，转移至100ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml置50ml量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液按西瑞香素含量测定项下测定。9次实验结果见表2。