同种异体心脏移植急性排斥反应的无创监测

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1、同种异体心脏移植急性排斥反应的无创监测作者：马涛，胡军，蔡振杰，李彤，王晓武，程亮【摘要】目的:观察同种异体心脏移植术后血清C反应蛋白（CRP）的动态变化，探讨监测其血清浓度水平在评价移植成活质量及判断心脏排斥反应的作用.并研究体外单项混合淋巴细胞培养作为无创心脏移植排斥反应监测方法及意义.方法:26例原位心脏移植患者手术前后及心内膜心肌活检（EMB）时同期监测受体血清CRP浓度水平，依术后30d内受体是否成活分为成活组（n=24）与死亡组（n=2）；依EMB标本（n=32）病理等级（ISHLT）分为阴性组（0，1a,n=24）和排斥组（1b，＞1b，n=

2、8）.通过改良的单向混合淋巴细胞培养与心肌内膜活检(EMB)相对照，测定淋巴细胞活性与心肌活检病理等级的相关性.结果:CRP值在移植早期随着手术创伤的恢复而降低，成活组与死亡组在后期CRP水平差别明显.阴性组与排斥组两组间CRP水平有明显的差异(P<0.05)，心脏排斥反应发生时血浆中CRP浓度水平升高.改良的体外单项混合淋巴细胞培养结果与心肌内膜活检病理等级有很好的相似性.结论:CRP可作为判断心脏移植早期成活质量的标志，对监测心脏移植术后有否可能的排斥反应有一定的提示意义.改良的体外单向混合淋巴细胞培养方法可作为无创监测心脏移植排斥反应的有效手段之

3、一.【关键词】心脏移植；C反应蛋白；混合淋巴细胞培养；急性排斥反应0引言排斥反应及严重感染是限制心脏移植受体成活的主要因素，目前用于移植后监测心肌损伤和排斥反应的指标还相对较少，诊断心脏移植排斥反应发生的“金标准”仍是心肌活检(EMB)，选择一种高敏感性和特异性、低风险、低成本、方便快速的无创监测指标，是临床研究的重要课题之一.C反应蛋白（CreactiveprotEinCRP）由肝细胞合成，是一个急性时相特征蛋白，炎症和组织损伤可引起其血浆浓度升高.淋巴细胞是构成机体免疫系统的基本单位，T淋巴细胞是心脏移植受体排斥异体抗原的重要部分，供体抗原在一定条

4、件下可诱导淋巴细胞凋亡，我们经过对心脏移植受体血清CRP动态变化及免疫系统跟踪观察，并对传统的混合淋巴细胞培养（mixedlymphocyteculture，MLC）技术进行改良，采取心脏移植受体外周血淋巴细胞体外混合培养以期准确而无创监测心脏移植后急性排斥反应.1对象和方法1.1对象截止20030926我科心脏移植患者26（男21，女5）例，年龄12～68岁，体质量31～86（平均59±14）kg.其中17例为扩张性心肌病，4例为缺血性心肌病，3例为克山病，1例先心病，1例为冠心病搭桥术（CABG）后.心功能（NYHT）III级4例，Ⅳ级22例.术前超

5、声心动图示左室射血分数（EF）0.21～0.42，平均0.31±0.09；术前右心导管检查示肺动脉收缩压（PAP）32～56（平均45±12）mmHg（1mmHg=0.133kPa）；肺小血管阻力1.3～6.33（平均2.95±0.8）MF2g/d(分2次口服)，术中开始体外循环前将甲基强的松龙1000mg加入预充液中，停机后再静脉推注甲基强的松龙500mg.术后采用FK506,MMF（骁悉）和泼尼松三联免疫方法，给予甲基强的松龙5mg/（kg·d），持续1g/(kg·d)，总量每日递减5mg，直至15mg维持半年；FK506用量为0.1～0.33mg/(k

6、g·d)，术后1mo维持血中FK506的谷值在15～25μg/L，3mo后为5～15μg/L；MMF用量为2.0g/d，分2次口服，术后半年减至1.0g/d，分2次口服.术后1mo行心肌内膜活检(endomyocardialbiopsy,EMB)时抽取外周静脉抗凝血，分离外周淋巴细胞.在获取脑死亡心脏移植供体心脏时，同时无菌切取部分供体脾脏，以制备供体淋巴细胞样本.1.2方法1.2.1CRP检查采取受体外周静脉血离心后ELISA法检测，移植前检查1～2次，移植后每天检查1次至1mo，在受体复查及心内膜心肌活检时同期检查.其参考的正常范围0.2～5.0mg/L

7、.1.2.2心内膜心肌活检（endomyocardialbiopsy,EMB)心脏移植后3mo内做活检1～2次，3mo后每隔6mo左右检查一次，怀疑发生排斥反应时随时做.每次活检均在局麻、X线引导下取右心室室间隔处标本，40g/L甲醛固定液固定做病理和2.5g/L戊二醛固定液固定做电镜检查.病理切片石蜡包埋，HE染色，急性心脏排斥反应等级按照ISHLT（InternationalSocietyofHeartandLungTransplantation）1990年分级标准（0～4等级）进行排斥反应分析.1.2.3混合淋巴细胞培养①供体淋巴细胞的制备在RPMI

8、1640培养液中研磨供体脾脏，将细胞悬液离心10mi