复合螺旋藻多糖对人胃癌mgc细胞的抑制作用论文

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1、复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用论文乔明霞，于蕾妍，郝言芝，郭春生，张志娟，王清吉【摘要】目的研究复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用。方法将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分（GBE）以不同剂量按一定比例复合，观察复合制剂在体外对人胃癌MGC细胞的抑制作用。结果PSP与GBE1∶1比例复合组、1∶2比例复合组和2∶1比例复合组对人胃癌MGC细胞的抑制率，高剂量时分别比空白对照组提高92.44％（P＜0.01）.freela公司）。1.4.2试剂配制细胞培养液的配制：将1包RPMI1640，2.0gNaHCO3，青霉素、链霉素各10万U和2.0g

2、Hepes放于烧杯中，加适量三蒸水在磁力搅拌器上溶解，并定容至1L，用5.6％NaHCO3溶液调节pH至7.2～7.4，用0.22μm双层滤膜过滤除菌，4℃冰箱保存。磷酸盐缓冲液（PBS）的配制：准确称取Na2HPO4·H2O1.56g，KH2PO40.20g，KCl0.20g，NaCl8.00g，加三蒸水溶解并定容至1L，调节pH至7.2，115.6℃高压蒸气灭菌30min，并分装成100ml/瓶，4℃冰箱保存。0.25％胰蛋白酶溶液的配制：称取胰酶0.25g，EDTA0.02g，加入灭菌的PBS液100ml充分搅拌溶解，调pH至7.2～7.4，置4℃冰箱过夜，

3、0.22μm双层虑膜过滤除菌，并分装入瓶（10ml/瓶）。-20℃冰箱保存备用。MTT溶液的配制：称取MTT250.00mg，加PBS50ml，在磁力搅拌器上搅拌30min，使MTT充分溶解，继续加PBS使MTT溶液的终浓度为5mg/ml，用双层0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，分装，4℃保存，两周内有效。1.5供试药物的配制按实验最高浓度的100倍配制母液，溶剂为PBS与DMSO等体积混合物。使用前用培养液稀释到实验设计浓度，最终溶剂在培养液中的浓度不超过1％。各实验组最终药物浓度如表1。表1实验分组及各实验组药物浓度（略）2方法首先取对数生长期的人胃癌MGC细胞

4、用胰酶消化，以含10％小牛血清的RPMI-1640培养液稀释细胞，制成5×104/ml细胞悬液。将配制好的细胞悬液加入96孔培养板中，每孔200μl，置37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，按分组情况加入不同复合比例的供试药物，继续培养72h，培养结束前4h，每孔加MTT20μl，继续培养4h后，直接吸弃上清液，然后加DMSO200μl/孔，微量振荡器振荡5min，使深蓝色沉淀物完全溶解。用Model550多孔自动酶标仪比色(波长570nm)，测吸光度值，并按以下公式计算生长抑制率：细胞存活率（％）=抗癌药物组吸光度值/细胞对照组吸光度值×100％。抑制率（％）

5、=100％－细胞存活率3结果由表2可见，高剂量的PSP，银杏黄酮和银杏内酯3种单一成分都对人胃癌MGC细胞有一定的抑制作用，其中PSP的抑制效果较好，银杏黄酮的抑制效果较差。PSP与银杏叶有效成分按3种比例复合使用，其中1∶1比例复合组抑制人胃癌MGC细胞效果最好。表2高剂量复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用（略）由表3可见，中剂量的PSP，银杏黄酮和银杏内酯3种单一成分对MGC细胞的抑制作用，银杏黄酮效力最高。复合比例的PSP与银杏叶有效成分的抑瘤效果较单一成分高。其中1∶1复合组的效果最好。表3中剂量复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用（略）由表

6、4可见，低剂量的PSP，银杏黄酮和银杏内酯3种单一成分组以及复合比例的PSP与银杏叶有效成分对人胃癌MGC细胞的抑制作用，银杏黄酮组效果较好；其它组效果不明显。表4低剂量复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用（略）4讨论螺旋藻中所含有的最主要的活性成分之一为螺旋藻多糖，它主要由D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖和葡萄糖醛酸组成，是一种水溶性多糖。李羚等［3］报道利用Fenton反应，螺旋藻多糖能有效清除·OH、O2-·自由基，对脂质过氧化及DNA的·OH氧化损伤有显著抑制作用。于红等［4］报道随螺旋藻多糖浓度的增加HeLa细胞和HeGp-2细胞的存活率逐渐降低

7、，但对正常人二倍体成纤维细胞无影响,光镜下观察螺旋藻多糖作用24～48h后HeLa细胞出现明显的形态学改变。关燕清等［5］报道螺旋藻多糖可协同固定化藻蓝蛋白对体外培养的人胰腺癌SGC在体外就有较好的抑制作用。刘力生等［9］报道螺旋藻多糖能够显著提高机体非特异性的细胞免疫功能和特异性的体液免疫功能。这可能与PSP、银杏黄酮和银杏内酯含有羟基或酚羟基结构有关。其中发现单一的PSP和银杏内酯组对人胃癌MGC细胞的抑制呈剂量依赖趋势。高剂量组的抑制效果明显优于中、低剂量组。王晓杨等［10］报道螺旋藻多糖可促进ConA诱导的体外小鼠淋巴细胞转化，且表现出剂量依赖关系。而实验

8、发现银杏黄