复合螺旋藻多糖对人胃癌mgc细胞的抑制作用

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1、复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用乔明霞，于蕾妍，郝言芝，郭春生，张志娟，王清吉【摘要】　　目的研究复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用。方法将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分（GBE）以不同剂量按一定比例复合，观察复合制剂在体外对人胃癌MGC细胞的抑制作用。结果PSP与GBE1∶1比例复合组、1∶2比例复合组和2∶1比例复合组对人胃癌MGC细胞的抑制率，高剂量时分别比空白对照组提高92.44％（P＜0.01），26.36％（P＜0.01）和71.32％（P＜0.01）；中剂量时分别比空白对照组提高62.37％（P＜0.01），20.57％（P＜0.01）和

2、24.15％（P＜0.01）；低剂量时分别比空白对照组提高27.94％（P＜0.01），30.36%（P＜0.01）和17.92％（P＜0.01）。结论单一成分的螺旋藻多糖组对人胃癌MGC细胞也有较好的抑制作用，并呈剂量依赖性。高、中剂量复合螺旋藻多糖对人胃癌MGC细胞的抑制作用，1∶1比例配比时抑制效果最好。其中高剂量组1∶1配比时抑制率达到92.4％。表明复合螺旋藻多糖在该剂量配比时协同增效作用最大。【关键词】螺旋藻多糖银杏叶有效成分人胃癌MGC细胞抑瘤率　　胃癌是世界上第二大癌症死因，该疾病是严重威胁人类健康的恶性肿瘤之一。目前临床上除了手术和放射疗法外，主要采用环磷酰

3、胺等化学合成药物治疗肿瘤疾病，但这些药物在杀伤肿瘤细胞的同时，对患者的机体也造成了很大的损伤，因此，筛选无毒副作用的天然药物用来治疗肿瘤疾病成为医学界研究的热点。　　螺旋藻多糖作为一类具有重要生物活性的天然多糖化合物，其生物活性已逐渐为人们所认识。研究发现，螺旋藻多糖是一种很好的免疫增强剂，目前已被逐渐应用于临床和药理实验。据报道，银杏叶有效成分具有抗氧化、降血脂、提高免疫力、抗肿瘤等方面的作用〔1〕，它们的药理作用也不断被认识，临床应用也越来越广泛。本实验将螺旋藻多糖（PSP）与银杏叶有效成分(GBE)按一定比例复合，观察复合制剂在体外对人胃癌MGC细胞的抑制作用。　　1材

4、料与仪器　　1.1螺旋藻多糖与银杏叶有效成分螺旋藻购于中国科学院南海海洋研究所三亚站，为浅绿色粉末。参照文献〔2〕，采用三氯乙酸除蛋白法提取螺旋藻多糖（PSP），多糖含量93％以上；银杏叶有效成分（GBE）为实验室自提，总黄酮含量≥24％，萜内酯含量≥6％。　　1.2仪器　　超净工作台（苏州净化设备厂）；CO2恒温培养箱（南京畅翔仪器设备有限责任公司）；双目倒置显微镜（凯迪高速分析仪器有限公司）；Model550自动酶联检测仪（美国Bio-rad公司）。　　1.3肿瘤细胞人胃癌MGC细胞购于山东省医学科学院药物研究所。　　1.4试剂及配制　　1.4.1试剂　　RPMI1640

5、培养基（Gibco公司）；小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；二甲亚砜（DMSO）（上海生工生物工程有限公司）；噻唑兰（MTT）（Sigma公司）。　　1.4.2试剂配制　　细胞培养液的配制：将1包RPMI1640，2.0gNaHCO3，青霉素、链霉素各10万U和2.0gHepes放于烧杯中，加适量三蒸水在磁力搅拌器上溶解，并定容至1L，用5.6％NaHCO3溶液调节pH至7.2～7.4，用0.22μm双层滤膜过滤除菌，4℃冰箱保存。　　磷酸盐缓冲液（PBS）的配制：准确称取Na2HPO4·H2O1.56g，KH2PO40.20g，KCl0.20g，NaCl8.00g

6、，加三蒸水溶解并定容至1L，调节pH至7.2，115.6℃高压蒸气灭菌30min，并分装成100ml/瓶，4℃冰箱保存。　　0.25％胰蛋白酶溶液的配制：称取胰酶0.25g，EDTA0.02g，加入灭菌的PBS液100ml充分搅拌溶解，调pH至7.2～7.4，置4℃冰箱过夜，0.22μm双层虑膜过滤除菌，并分装入瓶（10ml/瓶）。-20℃冰箱保存备用。　　MTT溶液的配制：称取MTT250.00mg，加PBS50ml，在磁力搅拌器上搅拌30min，使MTT充分溶解，继续加PBS使MTT溶液的终浓度为5mg/ml，用双层0.22μm的微孔滤膜过滤除菌，分装，4℃保存，两周内有

7、效。　　1.5供试药物的配制　　按实验最高浓度的100倍配制母液，溶剂为PBS与DMSO等体积混合物。使用前用培养液稀释到实验设计浓度，最终溶剂在培养液中的浓度不超过1％。各实验组最终药物浓度如表1。表1实验分组及各实验组药物浓度（略）　　2方法　　首先取对数生长期的人胃癌MGC细胞用胰酶消化，以含10％小牛血清的RPMI-1640培养液稀释细胞，制成5×104/ml细胞悬液。将配制好的细胞悬液加入96孔培养板中，每孔200μl，置37℃，5％CO2培养箱中培养24h后，按分组情况加入不同复合比例的供试