microRNA-28对胃癌细胞MGC-803调控作用的研究

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1、学校代码10459学号或申请号201512283182密级硕士学位论文microRNA-28对胃癌细胞MGC-803调控作用的研究作者姓名：张继导师姓名：刘宏民教授学科门类：医学专业名称：药物化学培养院系：药学院完成时间：2018年5月AdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterResearchabouttheeffectofmicroRNA-28ontheregulationofMGC-803ingastriccancercellsByJiZhangSupervisor：Prof．Ho

2、ng-minLiuMedicinalChemistrySchoolofPharmaceuticalSciencesMay，2018摘要目的：已知LSD1的高表达是诱导包括胃癌在内多种癌症的主要原因之一，而很多在其它肿瘤细胞中可以显著下调LSD1表达的microRNA在胃癌细胞中却没有相关作用。本课题的目的在于找到一种可以在胃癌细胞中下调LSD1蛋白表达的microRNA，并研究其对胃癌细胞的影响和作用。这将为胃癌的治疗探寻现实的解决途径。方法：通过对4株胃癌细胞LSD1基因mRNA的3′UTR区的检测，利用开源软件对可能下调人LSD1蛋白表达的microRNA进行预测

3、。找到目标microRNA后，对胃癌细胞MGC-803分别进行瞬时转染microRNA及其相应的抑制剂，然后分别提取总蛋白进行WesternBlot实验，找到效果显著的microRNA来进行下一步的研究。在4种胃癌细胞及胃黏膜上皮细胞中，分别提取之前已选定的microRNA，通过qPCR实验检测胃癌细胞中这种microRNA的含量是否明显小于胃黏膜上皮细胞，并确定此种microRNA含量最低的胃癌细胞，针对这种胃癌细胞继续进行增殖、迁移、侵袭、克隆和细胞周期实验。还可以通过确认病人组织的免疫组织化学实验来验证这种microRNA与LSD1表达的关系。结果：BGC-82

4、3、HGC-27、MGC-803和SGC-7901这4种胃癌细胞的LSD1基因mRNA的3′UTR区都发生了T281G和G283T突变，突变会改变LSD1基因3′UTR区的二级结构，进而影响到microRNA与其结合的稳定性。通过软件预测了10种microRNA，并进行WesternBlot实验的验证，找到目前尚未见于报道的下调LSD1蛋白表达的microRNA-28。并且从临床的病人样品中发现，癌旁组织中的microRNA-28含量明显高于癌组织，LSD1表达量情况相反。检测microRNA-28的含量，其在胃癌细胞内含量均明显低于胃黏膜上皮细胞，同时MGC-803

5、细胞内microRNA-28的含量在4种胃癌细胞中最低。继续对MGC-803细胞转染microRNA-28及其抑制剂进行体外实验，发现microRNA-28可以有效抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆能力，显著降低LSD1的表达。但microRNA-28抑制剂不能显著促进癌细胞的增殖和迁移能力，也不能显著升高LSD1的表达。而在细胞周期实验中，瞬时转染microRNA-28和microRNA-28抑制剂的胃癌细胞MGC-803对细胞周期的影响相似，都明显不同于未进行转染的胃癌细胞MGC-803。同时对Usp28蛋白的WesternBlot实验检测也发现ImicroRN

6、A-28及microRNA-28抑制剂在胃癌细胞MGC-803中，实验结果与LSD1的情况相似。结论：胃癌细胞LSD1基因3′UTR区的突变会改变LSD1基因3′UTR区的二级结构，进而影响miRNA与其结合的稳定性，通过WesternBlot实验检验开源软件预测的10种microRNA，明确了目的microRNA-28。通过一系列实验证明了microRNA-28对胃癌细胞各方面的抑制作用。对胃癌治疗的研究起到了重要的现实意义。关键词：胃癌LSD13′UTRmicroRNAmicroRNA-28IIAbstractObjective：Itisknownthathigh

7、expressionofLSD1isanimportantcauseofinducingvariouscancerssuchasgastriccancer.However,microRNAsthatsignificantlydown-regulatetheexpressionofLSD1inothertumorcellsareineffectiveingastriccancercells.ThepurposeofthisprojectistofindamicroRNAthatcandown-regulatetheexpressionofLSD1pro