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时间:2018-11-21
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1、盐酸小檗碱对糖尿病大鼠胸主动脉内皮损伤的保护作用作者:张卓王春梅王春艳白岩王丽杰徐嘉琪陈立【摘要】 目的探讨盐酸小檗碱对2型糖尿病血管内皮功能损伤的保护作用。方法采用小剂量链脲佐菌素腹腔注射加高脂饲料喂养的方法建立2型糖尿病大鼠模型。将模型动物随机分为模型组、盐酸小檗碱组,另设正常对照组以及正常盐酸小檗碱组。用药组灌胃给药8NOlevel,SODactivityandeNOSexpressionsofaortaintype2diabeticratsinducedbyhighfatdietplusSTZandexplo
2、rethemechanismunderlyingprotectiveeffectofberberineonendothelialdysfunction.Methods)血管内皮功能损伤的保护作用。 1材料与方法 1.1动物及饲料 选用健康清洁级雄性odel550,为BioRad公司产品。755B型紫外可见分光光度计,系上海精密科学仪器有限公司分析仪器总厂产品;台式高速低温离心机,美国索福公司产品;1261型γ放射免疫计数仪,LKB公司产品。 1.4T2DM动物模型的建立及分组〔4〕 60只大鼠模型,以高脂饲
3、料喂养。大鼠高脂饲料喂养4g/kg)2次,间隔1mol/L作为判断模型成功的标准。将制备成功的T2DM大鼠26只随机分为糖尿病模型组(T2DM)和盐酸小檗碱治疗组(T2DM+BER)。T2DM+BER组和CON+BER组以盐酸小檗碱100mg·kg-1·d-1连续灌胃8g/kg)腹腔注射麻醉,腹主动脉取血并处死动物。每只大鼠约可以取血4~5ml,分离血清,分装入Eppendorf管,-70℃冻存,用于检测FPG、TG、TC和FINS。FPG、TG和TC采用酶学方法检测。FINS由吉林大学第三医院核医学科采用放免法检测。
4、 1.6葡萄糖耐量实验 葡萄糖耐量实验进行前,大鼠禁食12~16h,自由饮水,腹腔注40%葡萄糖(2g/kg体重),在葡萄糖注射前、注射后30、60、120min断尾取血,3500r/min离心15min,吸取血清。随后按照试剂盒说明书,利用葡萄糖氧化法测定血清中葡萄糖含量。 1.7血清中NO和SOD的检测 分别按照NO和SOD试剂盒说明书方法测定血清中NO及SOD的含量。 1.8免疫组化方法检测大鼠胸主动脉组织eNOS蛋白表达 切片常规用二甲苯脱蜡,经各级乙醇至水洗。抗原热修复,已修复切片恢复室温;PBS
5、洗3次,每次3min;滴加正常山羊血清封闭液,室温20min。滴加一抗(1∶150),4℃过夜;PBS洗3次,滴加生物素化二抗,室温20min;PBS洗3次,滴加HRP链霉卵白素,室温20min;DAB显色。苏木精复染2min、盐酸乙醇分化;脱水、透明、中性树胶封片。阴性对照用PBS代替一抗。于显微镜400倍下观察细胞质出现棕色或棕黄色颗粒者为阳性,不显色者为阴性。 1.9统计学方法 实验数据用x±s表示,统计分析采用SPSS13.0软件处理,多组间比较用单因素方差分析(One组大鼠精神萎靡、毛发稀落欠光泽,糖尿
6、病症状较重,与其他3组相比,体重略有升高,但无统计学差异(P>0.05)。T2DM+BER组大鼠经灌胃治疗8. 2.2盐酸小檗碱对大鼠腹腔注射葡萄糖耐量的影响 如图1所示,CON组、CON+BER组及T2DM+BER组在葡萄糖注射后30min血糖达峰值,在90min内逐渐下降;而T2DM组血糖在60min达峰值,后缓慢下降,T2DM组血糖水平与CON组相比一直维持在较高水平。结果表明T2DM大鼠对葡萄糖耐受力下降,出现IR,而盐酸小檗碱可明显提高机体对葡萄糖的耐受量,改善了IR。 2.3盐酸小檗碱对血清NO
7、含量和SOD活性的影响 与CON组比较,T2DM组血清NO含量及SOD活性明显降低(P<0.01),盐酸小檗碱治疗8JManagCare,2003;9(3Suppl):S63S80. 2JeongaK,MonicaM,Kolecularandpathophysiologicalmechanisms〔J〕.Circulation,2006;113:1888904. 3ZhangY,LiX,ZouD,etal.Treatmentoftype2diabetesanddyslipidemiaultipleloodel
8、〔J〕.ExpDiabetesRes,2008;70:405. 5BrandesRP,Schmitz,etal.AnendotheliumderivedhyperpolarizingfactordistinctfromNOandprostacyclinisamajorendotheliumdependentvasodil
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