盐酸小檗碱对大鼠非酒精性脂肪肝的作用及机制探讨

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1、河北医科大学硕士学位论文盐酸小檗碱对大鼠非酒精性脂肪肝的作用及机制探讨姓名：于书雷申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：冯丽英201203中文摘要盐酸小檗碱对大鼠非酒精性脂肪性肝病的作用及机制探讨摘要非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)是一种无过量饮酒史，由各种原因引起的以肝细胞内脂肪堆积为主要特征的临床病理综合征。目前发现肥胖，2型糖尿病，高脂血症等因素单独或共同构成了NAFLD的易感因素。近年来随着人们生活水平的不断提高，NAFLD以高发病率，低龄化趋势日益受到人们的重视。目前己成为全球普遍关注的医学

2、问题和社会问题。然而对于NAFLD的发病机制尚无明确阐述，有研究发现胰岛素抵抗(insulinresistance，IR)，脂质代谢紊乱，炎性因子及内毒素等在其发病机制中发挥了重要作用。但目前对其尚无确切的有效治疗药物。盐酸小檗碱(Berberinehydrochloride，BBR)即黄连素，作为治疗肠道感染性疾病的药物，近年来研究发现其对降低血糖，改善IR；调节脂质异常等作用。并且其具有药源广泛，价格低廉，副作用小等优点。所以本实验通过高脂喂养建立大鼠NAFLD模型，并应用BBR对其进行干预治疗，以探讨BBR对大鼠NAFLD的治疗效果及其可能的作用机制。为今

3、后BBR在脂肪肝及降糖、降脂等作用的研究奠定基础。目的：高脂饮食建立NAFLD模型，给予BBR干预治疗。观察BBR对大鼠模型体重、肝指数、肝功能、血脂、IRJ：旨数、TNF．Q以及对肝脏病理学变化的影响。并探讨盐酸小檗碱防治NAFLD的作用机制。方法：1．将36只大鼠适应性饲养1周后，随机分为以下2组：正常组(n=lO)和高脂造模组(n=26)。两组大鼠自由饮水进食，正常组给予普通饲料喂养，高脂造模组给予高脂饲料喂养(84％普通饲料+lO％猪油+5％蛋黄粉+1％胆固醇)。连续喂养12周，每周定时称量大鼠体重1次。所有大鼠均在河北医科大学第二医院消化内科动物实验室

4、饲养，环境温度为25±2℃、明暗各12h。大鼠喂养12周末，正常组及高脂组各随机取2只大鼠处死，取肝组织，常规行HE染色，光镜下观察肝组织病理学变化，确认大鼠脂肪肝造模成功。中文摘要2．造模成功后将高脂造模组大鼠再随机分为模型组(n=8)、BBRd,齐U量组(n=8)、BBR大剂量组(n=8)。BBR应用蒸馏水充分混悬，BBR大、小剂量组分别给予BBR300m∥(kg·d)和150m∥(kg·d)灌胃，并继续给予高脂饮食。同时正常组和模型组大鼠均给予等体积蒸馏水灌胃。灌胃时间为每日上午9：00．10：00。持续灌胃4周，于4周末统一处死大鼠，处死前一晚禁食水12

5、小时。3．观察大鼠毛发和行为情况，电子天平称取大鼠体重、肝湿重，并计算肝指数=(旰湿重／体重X100％’))。各组动物经10％水合氯醛腹腔注射麻醉后处死，无菌无致热源条件下于下腔静脉采血5ml，将血液置于离心机内，3000r／min离心15分钟，分离血清用于：(1)鲎试剂法测定血清内毒素水平。(2)放射免疫法测定空腹血清胰岛素(FINS)含量，并计算稳态模式评估法胰岛素抵抗指数(HOMA．IR)：HOMA．IR=((FPG×FINS)／22．5。(3)采用全自动生化分析仪测定血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)

6、、高密度脂蛋白(HDL)、空腹血糖(FPG)等各项生化指标。4．取肝左叶约lcm×lcmx0．5cm肝组织固定于4％甲醛溶液中，石蜡包埋，切片，HE染色用以观察肝脏病理变化。取19肝组织放于EP管中，低温冰箱保存，用于制备肝组织匀浆，采用WestemBlm方法测定肝组织TNF．a含量。结果：1．各组大鼠体重、肝湿重及肝指数的变化情况：12周末行HE染色，确定NAFLD大鼠造模成功。16周末模型组大鼠体重(570．9士13．4)、肝湿重(19．82士2．47)，并计算出肝指数(3．48士0．46％)均明显高于正常对照组的体重(507．4士11．7)、肝湿重(12．

7、91士0．78)及肝指数(2．55士0．16％)(均P

8、2．38+3．78)和(