氧化苦参碱对小鼠局灶性脑梗死的保护作用论文

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1、氧化苦参碱对小鼠局灶性脑梗死的保护作用论文【摘要】目的观察氧化苦参碱(OMT)对小鼠局灶性脑梗死(CI)的保护作用。方法健康成年雄性昆明小鼠随机分为假手术组、模型组以及OMT预处理组。用线栓法制作小鼠永久性大脑中动脉闭塞模型。假手术组及模型组术前30min腹腔注射0.9%生理盐水4ml，OMT组腹腔注射OMT35mg/kg。记录小鼠清醒后神经功能缺损程度，TTC染色测定梗死体积，黄嘌呤氧化酶法测定SOD活性，TBA法测定MDA含量，TUNEL法测定细胞凋亡。结果与模型组相比，OMT组小鼠术后24h神经功能缺损评分下降，梗死体积缩小.freelg/kg)腹腔注射麻醉，仰卧固定，常规备皮、消毒

2、后颈部正中切口，分离暴露右侧颈总动脉及颈内外动脉，结扎颈总动脉近心端及颈外动脉起始部，颈总动脉靠近分叉处套线备用，动脉夹暂时夹闭颈内动脉。在距离颈总动脉分叉处2mm左右处剪一小口，插入单股尼龙线(长3cm，直径0.104mm，于1、2、3处分离标记)约11mm，有轻微阻力时停止，扎紧缝线，剪掉多余线栓，缝合并再次消毒皮肤。假手术组除不插线外，其余步骤相同。术中用白炽灯加温维持小鼠肛温约37℃。OMT为陕西慧科植物开发有限公司，纯度98%，生产批号SF20061215，临用时以蒸馏水制成混悬液。OMT预处理组在手术前30min腹腔注射OMT35mg/kg。各组小鼠均在手术后24h处死。1.4

3、观察指标(1)神经功能缺损评分：清醒后对小鼠神经功能缺损进行评分〔4〕。0级为无神经功能缺失症状;1级为左前爪不能完全伸展;2级为轻轻向后牵拉鼠尾并将后肢提起，左前爪抓力明显减低;3级为运动自如，但牵拉鼠尾时会向左侧倾斜或转圈;4级为向左侧倾斜或划圈运动;5级为刺激后运动;6级为刺激无运动，伴有意识障碍;7级为死亡;0～7分别为0～7分。选取1～5分小鼠进行相应指标检测，每组15只。(2)红四氮唑(TTC)染色测定梗死体积：3组大鼠中每组各取5只，手术后24h快速断头取脑，-20℃冷冻20min后行1mm厚冠状切片，立即置于1%TTC溶液中37℃恒温避光孵育30min，正常脑组织为红色，梗

4、死为白色。染色的切片经扫描后接入电脑。用ImagePro软件进行图像分析，计算梗死体积百分比。(3)SOD活性以及MDA含量测定：每组小鼠各取5只快速断头取脑，冰盘中分离出右侧额顶部脑组织，滤纸吸干水分，称重后制成10%组织匀浆，4℃3500r/min离心10min后取上清液，考马斯亮蓝法测定蛋白含量，按照试剂盒说明书操作。(4)TUNEL法测定细胞凋亡：每组小鼠各取5只，术后24h经麻醉后迅速开胸，暴露心脏，经左心室插管至升主动脉，剪开右心耳，先用0.1mol/L预冷PBS100ml灌注至清澈，再用预冷4%多聚甲醛灌注150ml。断头取脑，37℃4%多聚甲醛后固定4h，流水漂洗过夜，5

5、%、10%、15%、20%、25%、30%梯度蔗糖脱水直至沉底，用冰冻切片机做连续冠状切片，片厚6μm。切片经室温晾干，用含有1%TritonX100的PBS洗涤3×5min，按照TUNEL检测试剂盒说明书配制检测液，在样品上加50μl检测液，37℃避光孵育60min，孵育至45min时加入DAPI复染。PBS避光洗涤3×8min，油封片后在荧光显微镜下观察染色阳性的细胞。每组5张切片，每张切片取5个互不重叠的视野计算染色阳性的细胞百分比。正常细胞核为蓝色，凋亡的细胞胞核为黄绿色。1.5统计学处理计量资料以x±s表示，采用单因素方差分析。2结果2.1各组小鼠神经功能缺损评分比较假手术组小鼠

6、未见神经功能缺损症状(0分);模型组神经功能缺损较为明显〔(4.91±0.52)分〕，OMT预处理组神经症状明显减轻〔(2.58±0.37)分〕(P0.05)。2.2各组梗死体积比较假手术组未见病灶(0)，模型组以及OMT预处理组梗死灶主要位于右侧颞、顶叶皮质以及基底节区。其中模型组平均梗死体积百分比〔(50.78±3.96)%〕较OMT预处理组〔(30.82±2.97)%〕明显增高(P0.05)。2.3各组SOD活性以及MDA含量比较模型组SOD活性〔(55.32±5.69)U/mg〕较假手术组〔(70.82±4.78)U/mg〕明显减低(P0.05)，OMT预处理组SOD活性〔(61.

7、23±3.24)U/mg〕明显高于模型组(P0.05)。模型组MDA含量〔(15.68±4.57)nmol/mg〕较假手术组〔(6.48±2.37)nmol/mg〕明显增高(P0.05);而OMT预处理组MDA含量〔(7.38±2.56)nmol/mg〕则明显低于模型组(P0.05)。2.4各组细胞凋亡比较假手术组仅见少量凋亡细胞，凋亡率为(1.42±0.13)%;模型组凋亡细胞明显增多，凋亡率为(55.67±3.57)