苦参碱对balb-c免疫性肝损伤小鼠的保护作用

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1、苦参碱对BALB/c免疫性肝损伤小鼠的保护作用【关键词】苦参碱免疫性肝损伤卡介苗脂多糖苦参碱(matrine，Mat)是从豆科槐属植物苦豆子(SophoraalopecuroidesL)中提取物的生物碱，具有抗炎、抗病毒、提高免疫力、保护肝脏功能的作用。据文献报道，Mat对CCl4致肝损伤动物模型有肝细胞保护作用［1］，但目前尚未见到苦参碱对卡介苗(BCG)+脂多糖(LPS)诱发BALB/c小鼠免疫性肝损伤保护作用的报道。本实验以BALB/c小鼠为实验对象，探讨苦参碱对BCG+LPS免疫性肝损伤的保护作用。　　1

2、材料与方法　　1.1动物BALB/c小鼠，雄性，6～8周龄，清洁级，由宁夏医科大学实验动物中心提供，合格证号：SCXK(宁)2005-0001，在室温(21～23℃)、普通光照环境中饲养1周后实验，标准饲料喂养，自由饮水。　　1.2药物Mat购自宁夏紫荆花药业有限公司，批号：80041122，白色结晶；联苯双酯购自浙江万邦药业有限公司，批号：071003，每滴丸含联苯双酯1.5mg，临用前用生理盐水配至所需浓度。　　1.3主要试剂BCG系卫生部上海生物制品研究所产品，批号：200709001。LPS系美国Sigm

3、a公司产品，批号：LOT2010/08。MDA、GSH-Px、T-AOC试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，批号：20080306，考马斯亮蓝试剂盒由南京建成生物工程研究所提供，批号：20080625。　　1.4主要仪器AE100电子精密天平(METTLER)；UV/9100型紫外可见分光光度计(北京瑞利分析仪器公司)；TD5A-at给药组(20、40、80mg/kg)、阳性对照组即联苯双酯组(bifendate，150mg/kg)。造模方法参照文献［3-5］，除正常对照组外，其余各组第1天经小鼠腹腔注射BCG2

4、.5mg/0.2mL/只(约含5.0×107个活菌数)，第2天起，各给药组按0.1mL/10g体积分别给予不同剂量Mat和bifendate(联苯双酯)进行治疗，模型组和正常对照组给予同等体积NS，每天1次，灌胃给药，连续10d，第12天小鼠尾静脉注射LPS(7.5μg/0.2mL/只)进行攻击。注射LPS后，禁食12h，颈椎脱臼后颈静脉放血处死小鼠，立即摘取小鼠肝脏、脾脏标本进行有关检测。　　1.5.2指标检测取肝脏、脾脏称重，计算脏器指数［脏器重量(g)/体重(g)×1000］。冰浴下在肝右叶相同部位取肝脏0

5、.5g，用冷生理盐水洗去污血，加生理盐水制成10%的肝匀浆，离心10min，取上清液检测指标MDA、GSH-Px、T-AOC(按试剂盒说明书进行)。　　1.6统计学方法结果以(±s)表示，用SPSS11.5统计软件进行方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。　　2结果　　2.1Mat对免疫性肝损伤小鼠肝脏、脾脏指数的影响　　与正常对照组相比较，模型组小鼠肝脏、脾脏明显肿大，Mat20、40、80mg/kg及阳性对照组均能降低免疫性肝损伤小鼠的肝脏、脾脏指数(P＜0.01)，见表1。　　表1Mat对免疫性肝损伤小

6、鼠肝脏指数、脾脏指数的影响（略）　　与模型组比较＃＃P＜0.01；与正常组比较△P＜0.01　　2.2Mat对免疫性肝损伤小鼠GSH-Px、T-AOC、MDA的影响　　与正常对照组比较，模型组肝匀浆GSH-Px、T-AOC水平明显降低，同时MDA水平升高(P＜0.05)。Mat(20、40、80mg/kg)治疗组及Bif阳性对照组(150mg/kg)均能升高降低的GSH-Px、T-AOC水平，并降低升高的MDA水平(P＜0.05)，见表2。　　表2Mat对免疫性肝损伤小鼠肝匀浆MDA、SOD和GSH-Px水平的影

7、响（略）　　与模型组比较＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与正常组比较△P＜0.05，△△P＜0.01　　3讨论　　BCG+LPS免疫性肝损伤模型主要表现为Kuppfer细胞、单核细胞在致炎因子的作用下，向肝脏聚集并被致敏［2］。其病理机制与人肝炎的免疫功能紊乱相似，类似于人类肝炎发生的病理生理过程，是筛选和研究保肝药物较为理想的模型之一。　　早期研究发现，许多慢性肝炎患者存在诸多抗体，于是人们采取了多种方法建立了免疫性肝损伤模型［6］。目前，多数学者认为，乙型肝炎病毒感染引起的肝损伤主要与机体免疫应答有关，宿主

8、免疫调节紊乱是病理损伤的主要原因，其中细胞因子与其密切相关，并能加重肝炎病情。与化学性肝损伤模型(CCl4、D-Gal等)相比，免疫性肝损伤动物模型类似于人类肝炎发生的病理生理过程，是筛选和研究保肝药物较为理想的模型之一［7］。最新研究证明，肝损伤的发生发展与集聚在肝脏中的巨噬细胞(MΦ)的确有密切关系。BCG+LPS所致肝损伤的机制主要为巨噬细胞介导的免疫性肝损伤，BC