苦参碱对免疫性肝损伤保护作用的研究.doc

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1、苦参碱对免疫性肝损伤保护作用的研究【摘要】目的探讨苦参碱对免疫性肝损伤的治疗作用。方法采用猪血清腹腔注射法，导致大鼠肝损伤。采用苦参碱肌注治疗。利用电镜技术和免疫组织化学方法观察肝脏超微结构及贮脂细胞α肌动蛋白变化。结果苦参碱治疗后肝细胞膜性结构损伤恢复或减轻，贮脂细胞减少，其胞质中α肌动蛋白表达减少。结论苦参碱对大鼠免疫性肝损伤有保护作用，并有量效关系。【关键词】大鼠肝脏超微结构苦参碱免疫组织化学　　StudyontheProtectiveEffectofMatrineonImmuneLiverInjuryinRats　　Abstract：ObjectiveToinve

2、stigatetheprotectiveeffectofmatrineonimmuneliverinjuryinrats.MethodsRatswereadministratedintraabdominallyswineserumtoinduceimmuneliverinjurymodel,thenweretreatedwithmatrine.Theultrastructureoflivercellandα-SMAoffatstoringcellwereexaminedbyelectronicmicroscopicobservationandimmunohistochemica

3、lstaining.ResultsThemembranestructureinjuryoflivercellwasrestored,thefatstoringcelldecreased,andtheexpressionofδ-SMAwerereduced.ConclusionMatrinehadtheeffectofanti-immuneliverinjuryinadose-dependentmanner.　　Keywords：Rats；Liver；Ultrastructure;Matrine；Immunohistochemistry苦参碱是豆科植物苦参（别名苦豆子、广豆根、苦

4、骨、川参等）的提取物。由于苦参在我国分布广泛，是传统的中草药，其提取物在临床也被广泛应用［1，2］。为探讨苦参碱对肝脏的保护作用，我们利用免疫性肝损伤动物模型及电子显微技术和免疫组织化学染色方法，观察不同剂量苦参碱对肝细胞和肝贮脂细胞的影响，旨在阐明苦参碱对肝脏保护作用的机制。为预防和治疗肝病提供新途径。　　1材料与方法　　1.1动物及分组成年Wister大鼠40只，随机分为①正常对照组、②模型组、③苦参碱治疗1组（大剂量组）和④治疗2组（小剂量组），每组10只。　　1.2复制免疫性肝损伤模型及治疗方法将②③④组大鼠腹腔注射猪血清0.5ml，1次/周，持续8周；①组大鼠每周腹腔

5、注射生理盐水0.5ml，共8周。之后治疗③组肌注苦参碱注射液（广州明兴制药厂生产，批号970314）15mg/kg；连续治疗6周。④组肌肉注射苦参碱7.5mg/kg治疗6周，然后麻醉大鼠开腹取肝脏。3　　1.3组织固定及切片将数小块肝组织固定于2.5%戊二醛内，24h。然后常规制做超薄切片和铀-铅染色，供透射电镜观察。另取肝组织固定于10%中性甲醛内24h，常规石蜡包埋切片厚5μm，裱于涂胶玻片，37℃贮存待染。　　1.4免疫组织化学染色将石蜡切片常规脱蜡至水，常规SP免疫组化方法染色。其中α-肌动蛋白（α-SMA）多克隆抗体及SP试剂盒均购自北京中杉金桥生物技术公司。按试剂盒

6、规程操作。阴性对照用PBS代替Ⅰ抗，阳性对照为公司提供。　　1.5统计学处理组间比较采用t检验。　　2结果　　2.1肝组织超微结构变化模型组肝脏内汇管区扩大，胶原纤维增多，甚至出现假小叶，间质细胞成分增多，其中有较多贮脂细胞、成纤维细胞、淋巴细胞和少数粒细胞。电镜下肝细胞核膜出现锯齿状凹陷，核周隙宽窄不均匀，异染色质增多；胞质内高电子密度脂滴增多，线粒体肿胀，嵴减少或消失，甚至可见部分线粒体膜破裂现象。内质网扩张，呈泡状或不规则腔隙。粗面内质网脱颗粒。治疗组肝细胞核膜凹陷减少，核周隙均匀。胞质内线粒体基本恢复正常，不见膜破裂现象，但仍有嵴减少表现；少数内质网脱颗粒。　　2.2贮

7、脂细胞超微结构变化及免疫组化染色正常对照组贮脂细胞小而少，分布在汇管区或小叶周边窦周隙内。电镜下细胞器少，超薄切片中常见其胞质中有1～3个脂滴样包含物。模型组贮脂细胞增多，胞体稍增大，胞质中粗面内质网及线粒体增多，脂滴样包含物明显减少。免疫组化染色后，αSMA呈棕黄色颗粒，分布于胞质中。模型αSMA着色深，治疗组贮脂细胞减少，αSMA着色浅。经彩色图象分析仪进行形态学定量分析。结果见表1。表1免疫组化染色质贮脂细胞数密度及灰度值（略）　　3讨论采用猪血清注射法模拟免疫性肝损伤（肝纤维化