探讨黄芪、赤芍对小鼠免疫性肝损伤的保护作用

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1、探讨黄芪、赤芍对小鼠免疫性肝损伤的保护作用　肝脏担负着物质代谢和解毒的功能，是机体重要的器官，因而也易受到病毒、细菌、酒精等攻击，诱发肝脏损伤。肝损伤时肝枯否细胞的激活和各种炎症介质、细胞因子和氧自由基、一氧化氮等物质大量产生，导致炎症反应的发生。2006年选择毒性低，价廉的常用传统中药黄芪与赤芍对免疫性肝损伤保护作用进行研究。黄芪活性成分黄芪甙具有抑制脂氧化酶,减少脂多糖(LPS)的生成,提高肝脏谷胱苷肽(GSH)含量，抗自由基，调节代谢，保护线粒体,尤其在调节免疫、抗肿瘤、抗病毒、改善肝脏供血等方面有

2、重要作用[1，2]。有报道赤芍对乙型肝炎患者肝脏损害有保护作用[3]。单药黄芪及赤芍对动物免疫性肝损伤的保护作用国内均有报道，黄芪与赤芍二者联合用药的效果及机制未见报道，本研究使用卡介菌（BCG）和脂多糖（LPS）诱导小鼠免疫性肝损伤模型，选择血清酶学测定及超氧化物歧化酶（SOD）、肝脏脂质过氧化物丙二醛(MDA)为测定指标，观察黄芪注射液、赤芍注射液联合应用对免疫性肝损伤的保护作用。　　１材料与方法　　１．１材料　　1.1.1动物　　昆明系雄性小鼠，5～8周龄，体重（２０±２）g，由黑龙江

3、中医药大学实验动物中心提供。　　1.1.2试剂　　BCG由卫生部生物制品研究所提供，LPS购自Sigma公司，黄芪注射和赤芍注射液为成都地奥九泓制药厂药品，SOD、MDA试剂盒为南京建成生物工程公司产品，谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶（AST）、乳酸脱氢酶（LDH）试剂购于北京中生生物工程高科技公司。　　1.1.3仪器　　SpectraMAX190酶标仪、日立7600-020全自动生化分析仪。　　1.2方法　　1.2.1分组　　60只小鼠随机分为5组，对照组、模型组、黄芪组、赤芍组、黄芪赤芍联合组。对照

4、组腹腔注射性理盐水15ml/kg，模型组和三个给药组建立免疫性肝损伤模型。　　1.2.2造模　　鼠均经尾静脉注射BCG1mg(0.2ml)，3h后，给药组分别腹腔注射相应药物(黄芪15ml/kg，或赤芍15ml/kg，或黄芪和赤芍各7ml/kg），连续10d。最后1次给药3h后，经尾静脉注射LPS10μg（0.2ml），禁食不禁水，5h后，眼眶取血，分离血清，同时脱颈椎处死小鼠，迅速取出肝右叶组织制备成匀浆测MDA、SOD。　1.3血清酶活性测定　　血清ALT，AST，LDH活性测定用日立7600-

5、020全自动生化分析仪测定；MDA和SOD的含量测定，严格按试剂盒说明书操作。　　1.4统计学处理　　实验数据用SPSS13.0统计软件进行方差分析，实验数据以x±s表示。　　2结果　　2.1血清ALT、AST及LDH模型组与对照组比较，血清中ALT、AST和LDH升高，表明造模型成功。三个用药组与模型组比较各项指标均有显著性差异（P＜0.05，P＜0.01），说明黄芪注射液与赤芍注射液均能减少肝细胞内酶的逸出，对肝细胞有较明显的保护作用；黄芪组强于赤芍组（P＜0.01）,联合组作用更显著，

6、见表1。表1各组小鼠血清ALT、AST及LDH水平（略）注：与对照组比较，（1）P＜0.05，（2）P＜0.01；与模型组比较，（3）P＜0.05，（4）P＜0.01；与黄芪组比较，（5）P＜0.05；与赤芍组比较，（6）P＜0.05，（7）P＜0.01。　　2.2肝组织SOD及MDA模型组小鼠肝匀浆SOD水平低于对照组（P＜0.01），MDA含量高于对照组（P＜0.05），表明造模成功。黄芪注射液与赤勺注射液均能提高肝组织SOD活力，减少MDA含量，见表2。表2各组小鼠肝组织SOD及MDA水平（略）注：

7、与对照组比较，（1）P＜0.05，（2）P＜0.01；与模型组比较，（3）P＜0.05，（4）P＜0.01；与黄芪组比较（5）P＜0.01；与赤芍组比较（6）P＜0.05，（7）P＜0.01。　　3讨论　　多数学者认为慢性病毒性肝炎不是肝炎病毒对肝细胞的直接损伤，而是肝炎病毒侵入肝细胞后，激发人体免疫应答引起免疫性肝损伤。微量的BCG和LPS可诱导小鼠免疫性肝损伤模型类似于人类肝炎发生的病理生理过程，BCG首先致敏T淋巴细胞，特别是大量致敏肝内枯否细胞，使巨噬细胞聚集于肝脏，在注射LPS后激活致敏状态的细

8、胞，使其释放大量细胞因子，如一氧化氮、肿瘤坏死因子(TNF)、白细胞介素(IL)、自由基和白三烯等，进一步引起肝脏免疫损伤，因此是筛选治疗肝病药物较为理想的模型之一[7]。　　机体通过酶系统与非酶系统产生自由基，自由基攻击生物膜中的不饱和脂肪酸引发脂质过氧化作用，产生脂质过氧化物，如MDA，它能改变酶的功能，引起基因调控及表达错误，最终导致肝细胞变性、坏死。因此，MDA是体内脂质过氧化反应终产物，其水平的改变能间接地反映由于自