小鼠parp1基因rnai表达载体对lewis细胞株的影响论文

《小鼠parp1基因rnai表达载体对lewis细胞株的影响论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、小鼠PARP1基因RNAi表达载体对Lewis细胞株的影响论文王铁君邹永巍刘林林杨海山【摘要】目的观察PARP1基因RNAi表达载体对Leine?2000介导，将PARP11308的siRNA表达载体转染LeRNA表达水平。结果siRNA转染组及2Gy照射组的吸光度值与空白对照组比较差异有显著意义；2Gy照射组+siRNA组的吸光度值与2Gy照射组、siRNA组比较差异有显著意义。错义序列组与正常对照组比较无显著差异；2Gy照射组+错义序列组与2Gy照射组比较无显著差异。2Gy照射组+siRNA组对Le

2、RNA表达水平降低。siRNA转染、2Gy照射可诱导LeallinterferenceRNA，siRNA)技术能较好地解决应用阻断剂所带来的问题，从而可为肿瘤放射基因治疗研究提供新途径。本文应用PARP11308的RNAi载体转染小鼠LeineTM2000、DMEM培养基、胎牛血清，Invitrogen公司；MTT，Sigma公司。LeRNA没有明显的同源性，作为阴性对照）、siRNA组，2Gy照射组、2Gy照射+错义序列组、2Gy照射+siRNA组，每组3复孔，接种24h后弃去上清，以脂质体Lipofe

3、ctimineTM2000介导，将siRNA表达载体转染Lein，酶标仪检测吸光度（A）值。计算细胞抑制率。1.2.3转染siRNA后细胞凋亡的检测各组细胞以1.5×105/L密度接种于25cm2培养瓶，转染后继续培养48h，胰酶消化、离心收集并悬于PBS中，4℃、70%乙醇固定30min，用含RNase及碘化丙锭（PI）的染色液染色30min。应用流式细胞仪进行细胞凋亡分析。1.2.4转染细胞Parp1mRNA表达水平的检测各组细胞以1.0×105/L密度接种于6孔板，24h后弃去上清，转染siRNA，24

4、h后胰酶消化，离心收集。TRIzol提取各组细胞总RNA，取1μg总RNA进行RTPCR扩增。以Parp1的引物5′TCCCAAGGACTCCCTCCGCATGG3′、5′CTTTGCCTGCCACGCCTCCAGCC3′进行RTPCR，扩增片段为210bp，检测Parp1mRNA的表达情况。以βactin（5′GTCAGGTCATCACTATCGGCAAT3′，5′AGAGGTCTTTACGGATGTCAACGT3′）为内参照。将PCR扩增产物在1.5%的琼脂糖凝胶上电泳。2结果2.1

5、siRNA对LeRNA表达水平见图1。各组210bp处均可见清晰条带，siRNA和2Gy照射组+siRNA组条带明显减弱，各组内参照βactin条带一致。3讨论PARP是一类存在于多数真核细胞(酵母除外)中的蛋白质翻译后修饰酶〔6〕，在DNA的损伤修复、DNA复制、细胞增殖分化调控、细胞凋亡、基因组的稳定方面发挥着重要的作用〔7〕。PARP1活性抑制是辐射敏感性增高的主要原因，采用PARP1抑制剂可增强几种抗肿瘤因子杀伤肿瘤细胞的效能。但是由于PARP是一个多成员的蛋白质家族，化学抑制剂可能会带来非特异

6、性抑制效果，给特定PARP成员功能的研究带来不便。而且PARP1特异性阻断剂还处于实验阶段，毒副作用仍不清楚。siRNA是一种简单的、有效的代替基因敲除的工具，其作用机制是通过活化的小干扰RNA靶向降解目的mRNA，从而使目的基因表达沉默。2123nt的短片断双链RNA分子，能够以同源互补序列的mRNA为靶目标降解特定的mRNA。RNA干扰技术已经广泛用于基因功能的研究以及多种疾病的治疗，如乙型肝炎、丙肝、流感、艾滋病等〔8～10〕。本研究利用RNA干扰技术，将构建的针对PARP1的RNAi裁体转染小鼠L

7、eRNA表达水平降低。表明RNAi沉默PARP1基因的表达，针对PARP1的RNAi可以提高Leatindomains：accessgranted〔J〕.JCellSci，2004；117：81525.2HainceJF，RouleauM，HendzelMJ,etal.Targetingpoly(ADPribosyl)ation：apromisingapproachincancertherapy〔J〕.TrendsMolMed，2005；11：45663.3FarmerH，McCabeN，LordC

8、J,etal.TargetingtheDNArepairdefectinBRCAmutantcellsasatherapeuticstrategy〔J〕.Nature，2005；434：91721.4BryantHE，SchultzN，ThomasHD,etal.SpecifickillingofBRCA2deficienttumourserase〔J〕.Nature，2005；434：913