小鼠zfy基因rnai病毒载体的构建及性控效果的观察

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1、分类号：密级：学号：201010800620010108006单位代码：10759石河子大学硕士学位论文小鼠Zfy基因RNAi病毒载体的构建及性控效果的观察学位申请人马军德指导教师贾斌教授申请学位门类级别农学硕士学科、专业名称动物遗传育种与繁殖研究方向动物遗传育种所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2013年06月TheconstructionofRNAiviralvectorandobservationofsexcontrolfromMusZfygeneADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInFulfillmentoftheRequiremen

2、tsfortheDegreeofMasterofAgricultureByMaJun-de(AnimalGenetics,BreedingandReproductionScience)DissertationSupervisor:JiaBinJune,2013本研究由以下项目资助：“兵团博士资金专项”（项目编号：2012BB016)Doctor’sSpecialFundofXinjiangProductionandConstructionCorps(projectnumber:2012BB016)“石河子大学研究生创新基金”（项目编号：YJCX2010-Y02)CreativeFoundati

3、onofShiHeZiUniversity(projectnumber:YJCX2010-Y02)摘要本研究采用逆转录病毒载体介导的RNAi技术靶向抑制性别决定相关基因Zfy的表达，研究Zfy基因在生精过程中的相关功能及小鼠后代性别比例的变化。通过构建逆转录病毒载体Retrovirus/Zfy-shRNA和质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA，用构建好的病毒载体和质粒载体转染小鼠生精细胞，应用qRT-PCR检测各组细胞中Zfy基因的mRNA表达水平,验证干扰载体对Zfy基因的沉默效应。大量包装生产病毒颗粒和制备质粒载体并对公鼠进行睾丸打点注射，每隔7d注射1次，连续注射4次，最后一次

4、注射14d后，部分雄鼠宰杀采集睾丸组织，qRT-PCR检测Zfy基因的表达水平；另一部分雄鼠与每组超排处理的雌鼠按1:1合笼，间隔5d合笼1批雌鼠，共合笼3批，观察后代的性别比例。结果显示，逆转录病毒Retrovirus/Zfy-shRNA和质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA转染小鼠生精细胞后，Zfy基因mRNA表达水平都极显著低于空载体对照组和空白对照组（P<0.01），两对照组之间无差异显著性（P>0.05）；睾丸注射逆转录病毒Retrovirus/Zfy-shRNA和质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA后，Zfy基因mRNA表达水平都极显著低于空载体组和生理盐水组（

5、P<0.01），两对照组之间无差异显著性（P>0.05）；睾丸注射逆转录病毒载体Retrovirus/Zfy-shRNA的雄鼠组间隔5d交配1次，得到第1次交配出生的后代平均雌鼠率为71.43%，极显著高于空载体对照组（P<0.01），显著高于生理盐水对照组（P<0.05），第2、3次交配的后代平均雌鼠率逐渐降低，与对照组相比差异不显著（P>0.05）；睾丸注射质粒载体Psilencer/Zfy-shRNA的雄鼠组间隔5d交配1次，得到第1、2次交配出生的后代平均雌鼠率分别为71.00%和73.21%，都极显著高于空载体对照组（P<0.01），都显著高于生理盐水对照组（P<0.05）；第3次交

6、配的后代平均雌鼠率为63.64%，显著高于空载体对照组（P<0.05），但与生理盐水对照组之间差异不显著（P>0.05）。综上所述得出如下结论：成功构建了抑制小鼠Zfy基因表达的RNAi逆转录病毒载体和质粒载体，通过干扰Zfy基因的表达实现了对小鼠受精前的性别控制，同时也为研究其它动物受精前的性别控制奠定了基础。关键词：Zfy基因；RNAi；逆转录病毒载体；质粒载体；小鼠；性别控制IAbstractInthisstudy,thetargetingprotocolsofretroviralvector-mediatedRNAiareusedtoinhibittheexpressionofther

7、elatedgenderdeterminationgenesZfy,inordertostudytheassociativefunctionofZfygeneinsprematogenesisandthechangeofmiceoffspringsexratio.Constructingtheretroviralvectors(Retrovirus/Zfy-shRNA)andplasmidvect