犬zfxzfy基因干扰载体构建及性控效果的观察

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1、心一巧分类号：密级：１：２０３４０８０３５单位代码学号：１０＾９案石河子大学，巧女《隹俗ｃｉ；＇戀犬Ｚｆｋ／Ｚｆｙ基因干扰载体构建及性控效果的观察．．学位申请人绽俊明指导教师贾斌教授张银国教授申请学位类别专业硕壬专业名称兽医硕去研究领域兽医技术服务，所在学晓动物科技学院中国？新疆？石河子２０１５年９月＜分类号：密级：学号：2013408035单位代码：10759石河子大学硕士学位论文犬Zfx/Zfy基因干扰载

2、体构建及性控效果的观察学位申请人纪俊明指导教师贾斌教授张银国教授申请学位类别专业硕士专业名称兽医硕士研究领域兽医技术服务所在学院动物科技学院中国·新疆·石河子2015年9月TheRNAivecterConstructionandverificationoftheeffectsofsexualcontrolfromDogZfx/ZfygeneADissertationSubmittedtoShiheziUniversityInFulfillmentoftheRequirementsfortheDegreeofM

3、asterofVeterinarymedicineByJiJunming(VeterinaryTechnicalServices)DissertationSupervisor:Prof.JiaBinSept,2015本研究由以下项目资助“兵团科技支疆项目”（项目编号：2014AB012）ScienceandtechnologysupportingprojectofXinjiangProductionandConstructionCorps(projectnumber:2014AB012)石河子大学学位论文独创

4、性声明及使用授权声明学位论文独创性声明本人所呈交的学位论文是在我导师的指导下进行的研究工作及取得的研究成果？据我所知，除己经。文中己经注明引用的内容外，本论文不包含其他个人发表或撰写过的研究成果对本文的研究。做出重要贡献的个人和集体，均己在文中作了明确的说明并表示谢意／义时间：车）月日研究生签名：如＾＾使用授权声明本人完全了解石河子大学有关保留、使用学位论文的规定，学校有权保留学位论Ｘ并向国家主。管部口或指定机构送交论文的电子版和纸质版。有权将学位论文在学校图书馆保存并允

5、许被查阅有权自行或许可他人将学位论文编入有关数据库提供检索服务。有权将学位论文的标题和搞要汇编出版。保密的学位论文在解密后适用本规定。？／［年／／＞０研究生签名：＞：把俊崎时间月＾．■—Ｉ■？！时间＾曰导师签名：：年月＾贾Ｉ，觸Ｉ犬Zfx/Zfy基因干扰载体构建及性控效果的观察摘要动物性别控制技术的相关研究早在多年前就已经开始。目前国际上家畜性别控制技术方法主要有三种:（1）X精子与Y精子的分离方法。（2）胚胎的性别鉴定方法。（3）控制家畜受精环境方法。尽管家畜性别控制的方

6、法很多，但由于影响因素较多很难找到合适的即经济又方便的性别控制方法，在生产上推广应用。如今，随着科学技术水平的发展，以及对细胞遗传学、分子生物学等理论的深入研究，从基因水平研究控制性别已经成为一种新的研究方向，同时也使性别控制在生产中应用推广成为了一种可能。性别控制技术中的性控精液已经广泛应用于奶牛、猪等家畜的生产，而RNA干扰技术在新型的养犬业中还无人研究。RNA干扰是一种转录后的基因沉默现象且已被证实和广泛应用。通过体外人工合成或体内产dsRNA在细胞内特异性地降解其同源的mRNA，使得相应的基因沉默，实

7、现阻止目标基因表达的目的。Zfx/Zfy基因均属于ZFY(zincfinger-Y)基因家族，Zfx编码的蛋白作为转录因子，在精子形成过程中具有一些功能并与精子的发生有关。本研究拟在前期研究的基础上，构建出犬的Zfx、Zfy基因干扰的载体同时进行犬生精细胞、支持细胞体外培养，将干扰载体转入犬生精细胞，利用实时定量PCR检测Zfx、Zfy基因的表达情况，体外验证RNA干扰载体的沉默效应，筛选出犬体外有效的Zfx、Zfy基因的RNA干扰载体，再利用犬体外Zfy基因沉默效应有效的RNA干扰载体对犬进行Zfx、Zfy

8、基因体内干扰试验，最后统计其后代性别比例，以此达到研究人为控制犬性别的目的。具体研究结果如下：1.犬ZfxZfy基因mRNA序列（No.XM_005641207No.JX964866），按照RNAi设计原则，针对该基因的编码区各设计并合成3对shRNA干扰片段。以pLL3.7慢病毒骨架质粒作为载体，成功地构建了6个重组表达载体pLL3.7xa-xcpLL3.7ya-yc，经测序验证，成功构建了