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时间:2018-11-19
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1、CDK4、P16在中耳胆脂瘤中的表达及意义论文【摘要】观察细胞周期蛋白依赖性激酶CDK4、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子P16在中耳胆脂瘤上皮的表达情况,探讨它们在胆脂瘤发病机制中的作用。方法:采用免疫组织化学技术SABC法检测CDK4、P16在中耳胆脂瘤35例、正常外耳道皮肤20例中的表达,并结合胆脂瘤对听小骨骨质破坏程度,采用SPSS11.5软件进行统计学分析。结果:CDK4、P16均表达于胆脂瘤上皮的棘细胞层、颗粒层和角质层,阳性率分别为68.6%、88.6%,高于对照组(前者P=0.011,后者P=0.02)。二
2、者在胆脂瘤上皮的表达有一定的相关性,P<0.05;与中耳胆脂瘤听小骨骨质破坏程度之间无明显相关性,P>0.05。结论:CDK4与P16在中耳胆脂瘤发生中是共同而非单独起作用的.freelanmiddleearcholesteatomaandtoexploretheirrolesinthedevelopmentofcholesteatoma.Methods:ThirtyfivecholesteatomastissuesandtalhumanexternalearcanalskinensmunohistochemicalS
3、ABCmethodtodetecttheexpressionofCDK4andP16.Correlationsbetainlyintheprickleandgranularlayersofcholesteatomaepithelium.Theirpositiveratesalexternalearcanalepitheliumandthecholesteatomaepithelium(P=0.011,P=0.02),andapositivecorrelationbetagroup(P<0.05).Thestatistic
4、alresultsindicatedthattheexpressionofCDK4andP16didnotrelatedtotheextentofossiculardamageincholesteatoma(P>0.05).Conclusion:CDK4andP16areoverexpressedinhumanmiddleearcholesteatomaepitheliumandpositivelycorrelateentofcholesteatoma.Thecholesteatomaepitheliumhasahyp
5、erproliferationabilityandamechanismofinhibitingtheproliferation.Theresultofimmunohistochemicalexaminationisnotrelatedtothedegreeofossiculardestruction.[KEY柠檬酸高温高压抗原修复,自然冷却后蒸馏水洗2次×3?min,PBS洗2次×3?min;滴加抗原修复液Ⅰ10?minPBS洗3次×3?min;滴加正常山羊血清封闭液20?min甩去多余液体,不洗;滴加稀释后的一抗(C
6、DK4及P16稀释倍数均为1∶200),4?℃过夜;PBS洗3次×3?min;滴加生物素化山羊抗兔IgG,20?℃20?min后PBS洗3次×3?min;滴加SABC,20?℃20?minPBS洗4次×5?min;DAB(3,3′二氨基联苯胺4盐酸)室温下显色,镜下控制反应时间;蒸馏水洗涤,苏木素复染,脱水,透明,中性树胶封固,显微镜观察。1.4结果判断细胞不着色,或呈浅棕色的背景颜色为阴性表达。细胞内棕黄色或褐色颗粒为阳性表达。于400倍视野下随机选取5个不相重叠的着色视野进行观测,参照shimizu改良法[7]进行结
7、果判定及评分:(1)显色程度:基本不着色为0分,淡黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;(2)显色数量:无阳性细胞为0分,阳性细胞占计数细胞总数比例小于1/3为1分,1/32/3为2分,2/3以上为3分。结合显色程度及数量进行综合判断,计算二者相加得分,取平均值,小于3分为(-,阴性),3分为(+,弱阳性),4分为(,中等阳性),5分为(),6分为(),及为强阳性。1.5统计学处理采用SPSS11.5版软件包进行分析。组间阳性率及表达强度的比较采用ChisquareTest,必要时用Fisher精确概率法。
8、两两指标间相关性分析采用SpearmanRankCorrlation检验,所有结果均以P<0.05为差异有统计学意义。2结果CDK4在实验组与对照组的阳性表达都位于细胞浆,呈棕黄色颗粒状。在中耳胆脂瘤上皮中弥漫性分布于基底层以上各层,靠近基底层的部分细胞表达较弱(封三彩图1)。而对照组CDK4表达位于棘细胞层及颗粒层
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