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1、高效液相色谱法测定万寿菊花萃取物中的叶黄素含量论文李高峰王佩维聂永亮宋鹏【摘要】目的用高效液相色谱法对万寿菊花萃取物中所含的叶黄素含量进行分析测定。方法首先由万寿菊花萃取物制备出叶黄素单体，使用色谱柱为DiamonsilC18柱；流动相为甲醇-乙腈-醋酸乙酯-水（30∶29∶40∶1）;流速0.75ml·min-1;检测波长450nm;柱温25℃;进样量20μl。结果该方法最低检出限量1×10-7g·ml-1,叶黄素在0.8～24μg·ml-1范围内线性关系良好，方法精密度RSD（相对标准偏差）为0.96%,加标回收率为99
2、.49%～100.22%,RSD为0.82%～1.64%。结论该方法简便、准确、重复性好。【关键词】万寿菊叶黄素高效液相色谱法叶黄素(Lutein)，又名“植物黄体素”，是一种广泛存在于蔬菜、花卉、水果与某些藻类生物中的天然抗氧化剂。叶黄素高活性、富含电子的长多烯碳链，能保护人体免受单线态氧和自由基的作用而带来的伤害［1］，而且叶黄素是人体血液中主要的类胡萝卜素之一，能够抑制肿瘤生长.freeleter；叶黄素样品，由万寿菊干花经超临界CO2萃取制备出浸膏，经皂化、分离和纯化处理制得，所得的叶黄素样品经天然产物标准样品国家核
3、心实验室（北京）分析鉴定含量为97.29%作为标准样品。分析用试剂为分析纯，北京化工厂生产，水为二次蒸馏水。2方法万寿菊花经超临界CO2萃取得到萃取物，将万寿菊花萃取物在碱性条件下皂化，然后分离出游离叶黄素，经过纯化处理得到叶黄素样品。称取叶黄素样品20.0mg，用流动相配成8×10-6g·ml-1的溶液。色谱条件:色谱柱为DiamonsilC18柱；流动相为甲醇-乙腈-醋酸乙酯-水（30∶29∶40∶1）；流速0.75ml·min-1；检测波长450nm;柱温25℃;进样量20μl。3结果3.1色谱条件的确定试验了不同体积
4、比的甲醇-乙腈、甲醇-乙腈-醋酸乙酯、甲醇-乙腈-醋酸乙酯-水为流动相，最终确定流动相为甲醇-乙腈-醋酸乙酯-水（30∶29∶40∶1）；流速0.75ml·min-1；分离度、柱压及峰形均较理想，取叶黄素标准样品适量，用流动相溶解,制成8×10-6g·ml-1的溶液，用紫外-可见分光光度计在200～800nm的波长范围内扫描（见图1），最大吸收波长为450nm，本文选择450nm为检测波长。叶黄素样品高效液相色谱图见图2。3.2标准曲线的绘制及最低检出限的测定精密称取叶黄素对照品20.00mg置50ml量瓶中,用流动相溶解并
5、稀释至刻度。精密移取0.1，0.5，1，1.5，2，3ml置50ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。在下进样,以叶黄素峰面积A(mv·s-1)对进样浓度C(μg·ml-1)进行作图得到标准曲线,如图3。从图中可以看出,.freell-1范围内线性关系良好。利用此线性关系图可以对叶黄素浓度与峰面积做定量分析。以叶黄素峰面积A(mv·s-1)对进样浓度C(μg·ml-1)进行回归,得到回归方程为:Y=-14377.4+59811.7C,r=0.9939。此方程可以用于叶黄素峰面积与浓度之间的定量分析与计算。配制1×10-7g/
6、ml的叶黄素标准溶液，检出信号微弱，确定最低检出限为1×10-7g/ml。图3叶黄素标准曲线3.3精密度实验精密称取叶黄素对照品20.0mg，用流动相溶解制成8×10-6g/ml的溶液，在上述色谱条件下重复进样6次(实验Ⅰ)，将上述溶液放置2d后，再次重复进样6次(实验Ⅱ)。结果见表1。从表1数据可以知道，RSD为0.96%，表明该方法精密度良好。3.4加标回收率按不同比例准确称取已知含量的叶黄素样品和叶黄素标准品,配制如表2所示的5种样品,并用流动相溶解,制得浓度为8×10-6g·ml-1的溶液,在上述色谱条件下测定，每种
7、样品进样3次，结果见表2。回收率为99.49%～100.22%,RSD为0.82%～1.64%。表1精密度实验结果3.5样品测定将2007-12-13制得的叶黄素样品，分别于2007-12-14、2008-03-25、2008-04-29在上述色谱条件下检测（其间样品在暗处、0℃、密闭保存）每个样品进样3次，结果见表3。表3样品测定结果结果表明，叶黄素在暗处、0℃长时间放置对叶黄素含量有较明显影响。4结论实验研究选定了以甲醇-乙腈-醋酸乙酯-水（30∶29∶40∶1）为流动相;流速0.75ml·min-1;检测波长450nm
8、;柱温25℃;进样量20μl的色谱条件，有很好分离效果,且解决了峰的拖尾问题。本实验结果表明，叶黄素在一定浓度范围内呈良好的线性关系,回收率高,重复性好，无杂质干扰,是应用于制备叶黄素产品中控制和测定叶黄素含量，指导生产和控制产品质量的良好方法。【
