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1、板蓝根F022部位抗内毒素分子机理研究论文林爱华，刘云海，刘奕明【关键词】板蓝根；,,F022部位；,,内毒素；,,分子机理摘要：目的探讨板蓝根F022部位抗内毒素分子机理。方法内毒素定量检测法测定F022样品液对内毒素的破坏作用；研究样品液对内毒素致鼠巨噬细胞分泌炎性因子的抑制作用、对蛋白激酶MAPKp38活性的影响、对内毒素刺激鼠组织moesinmRNA分子表达及对内毒素诱导鼠体内TNFα,IL6和NO的抑制作用。结果1%F022对内毒素破坏率达到86.5%，F022能显著抑制内毒素刺激巨噬细胞分泌TNFα，IL6水平；抑制内毒素刺激蛋白激酶MAPKp3
2、8活性；降低内毒素刺激鼠肝、肾、脾组织moesinmRNA和体内TNFα，IL6和NO等炎性因子的表达。结论F022部位不仅直接破坏内毒素结构，且阻断内毒素引起的信号传导通路，从而抑制机体炎性因子的过度释放、抑制膜结构伸展刺突蛋白和丝裂原活化蛋白激酶的表达.freelofF022fromRadixIsatidisAbstract：ObjectiveTostudytheanti-endotoxicmolecularmechanismofF022fromRadixIsatidis.MethodsThecontentofF022pretreatedETinedul
3、ustest．TheinhibitionofTNFαandIL6ofmurineperitonealmacrophagesstimulatedbyLPS,themolecularexpressionofmoesinmRNA,MAPKp38,TNFα,IL6andNOinmicetissuesinducedbyLPSechanismofF022.ResultsItacrophagesculturebeforeadditionof50ngml1LPS．ProductionofTNFα,.freelacrophagesarkablydecreasedthemole
4、cularexpressionofmoesinmRNAinliver，kidney，spleeninducedbyLPSinmiceandinhibitedproductionofTNFα,IL6andNOinmicestimulatedbyLPS.ConclusionF022fromRadixIsatidiscannotonlydestroythestructureofendotoxin,butalsoobstructthesignaltransductionpathaybeastrongantiendotoxinfractionindrugsresear
5、chanddevelopment.Keyechanism内毒素(endotoxin，ET)是革兰氏阴性菌细胞壁外膜中的脂多糖(1ipopolysaccharide，LPS)成分。可刺激机体防御系统过度释放炎性因子肿瘤坏死因子(TNFα)、白细胞介素6(IL6)及一氧化氮(NO)等而引起发热、脓毒性休克、弥漫性血管内凝血(DIC)、多器官功能衰竭综合征(MODS)，以至死亡。中医对内毒素性疾病的早期表现常辨证为“实热证”，内毒素是“热毒、邪毒”的物质基础［1］。有关内毒素的研究一直是世界生物医学研究热点，而内毒素拮抗药的研究则是防治内毒素性疾病的重要策略之一。
6、先前研究已证实板蓝根有抗大肠杆菌O111B4内毒素作用［2，3］，我们从中筛选出抗内毒素活性强的F022部位［4，5］，为进一步探讨F022部位抗内毒素机理，本文研究了F022部位对内毒素致体内外分泌TNFα，IL6和NO的影响及对内毒素受体-膜结构伸展刺突蛋白(moesin)和内毒素介导的胞内信号传导过程中丝裂原活化蛋白激酶(mitogenactivatingproteinkinases，MAPK)p38激酶的影响。现报道如下。1器材1.1药品与试剂F022部位（本室制备）,冻干细菌内毒素工作标准品(E．coliO111B4，卫生部上海生物制品研究所，12
7、0EU／支)；Tris缓冲液(pH7．2)；细菌内毒素(4mg/支，中国药品生物制品检定所)；TNFα和IL6试剂盒(北京邦定泰克生物有限公司)；新生小牛血清(NBS，沈阳安迪生物高科技公司)；RPMI1640细胞培养液(Gibco公司)；0.9%氯化钠注射液(0.9%NS，连云港制药厂)；LPS(E．coliO2B，5mg/支，Sigma公司)用0．9%NS配制成100gL1；卡介苗(BCG，50mg/支,上海生物制品研究所)，实验前用0.9%NS配成10mg/ml；moesinmRNA原位杂交试剂盒(武汉博士德生物公司)，32P(DupontNEN产品)
8、，MAPKp38多克隆抗体(Sigma公司)，MBP
