hplc法测定万寿菊茎中叶黄素的含量论文

《hplc法测定万寿菊茎中叶黄素的含量论文》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、HPLC法测定万寿菊茎中叶黄素的含量论文曹洪昭聂传平李红玉【摘要】目的：建立一种测定万寿菊茎中叶黄素含量的HPLC方法。方法：采用DiamonsilC18色谱柱(200mm×4.6mm，5μm)，流动相：甲醇∶水=97.5∶2.5，流速：1.0mL/min，检测波长：445nm。结果：叶黄素在1.92～96μg/mL范围内，有良好的线性关系(r=0.9996)，平均回收率为98.9%，RSD1.04%。结论：该法简便准确、重现性好.freelg置25mL棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容，摇匀。置于阴凉避光处保存。2.2供试品溶

2、液得配制2.2.1提取取万寿菊茎适量，研磨成粉末，过20目筛，称取粉末10g置于500mL烧瓶中，加入石油醚∶无水乙醇(3∶l)混合溶剂250mL，提取温度50℃，超声振荡提取20min。过滤，除去滤渣，将滤液置于分液漏斗中。分离石油醚层，将其旋转蒸发浓缩。2.2.2皂化在浓缩液中加人20%的氢氧化钾甲醇溶液5mL，60℃水浴加热，反应6小时。用10%的盐酸调节pH值至中性，过滤，滤渣用适量的冷水和正己烷洗涤。2.2.3重结晶将2.2.2项下制得的滤渣溶于二氯甲烷中制得饱和溶液，向饱和溶液中慢慢逐滴加入适量的正己烷，放入冰箱

3、中于5℃静置过夜。次日，在4000r/min的条件下离心10min，得到的沉淀物用氮气吹干，用甲醇溶解于100mL棕色容量瓶中，摇匀，得供试品溶液，阴凉避光保存。2.3色谱条件的考察色谱柱：DiamonsilC18(200mm×4.6mm，5μm);流动相：甲醇∶水=97.5∶2.5;流速：1.0mL·min-1;检测波长：445nm;柱温：室温(25℃);进样量：20μL;定量方法：外标法;理论塔板数以叶黄素峰计算，不低于8000。2.4线性关系的考察精密量取对照品溶液0.1、0.2、0.5、1、2、5mL，分别置于10m

4、L量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样量20μL。以峰面积(Y)为纵坐标，叶黄素浓度(X)为横坐标建立标准曲线，回归方程为Y=0.785X+1.3466，R2=0.9996。由图1可知叶黄素浓度在1.92～96μg/mL范围内，呈良好的线性关系。2.5精密度试验精密移取叶黄素标准品溶液(28.8μg/mL)重复进样6次，测得叶黄素峰面积，实验结果见表1，结果显示6次测定叶黄素峰面积的RSD为1.7%。2.6稳定性试验精密移取叶黄素标准品溶液(28.8μg/mL)，每隔2h测1次其中的叶黄素含量。试验结果见表2。结果表明，在10

5、h内叶黄素含量没有发生显著变化，保持稳定。2.7重复性试验精密移取叶黄素标准品溶液(28.8μg/mL)，重复进样6次，测叶黄素峰面积，实验结果见表3。结果显示，6次测定叶黄素峰面积的RSD为0.81%。图1叶黄素的HPLC标准曲线表1精密度试验结果表2稳定性试验结果表3重复性试验结果2.8加样回收率试验取6份已知浓度的叶黄素样品溶液各5mL，分成3组并分别加入不同量的叶黄素标准品，定容至10mL，进样量为20μL。按上述色谱条件进行测定，计算得叶黄素的回收率在97.1%～100.2%之间，平均回收率为98.9%，RSD为1.

6、04%。2.9标准品、样品色谱图见图2、图3所示。2.10样品含量的测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液20μL进样，重复测定3次，求叶黄素峰面积的平均值，按外标一点法计算含量。表4加样回收率试验结果表5产品纯度测定的计算结果3讨论本试验比较了不同提取溶剂(正己烷、丙酮、无水乙醇、石油醚、四氢呋喃等)对叶黄素提取效果的影响，确定石油醚∶乙醇=3∶1为最佳提取溶剂。万寿菊茎中富含叶黄素，测定结果说明：其含量达75.42mg/100g，而文献报道羽衣甘蓝中叶黄素的含量为13.644mg/100g4。万寿菊茎是分离叶黄素的理想原料

7、药。本实验从提取方法到仪器分析的色谱条件都做了较多的筛选和摸索，在确保目标组分与其它组分良好分离的前提条件下，充分考虑了流动相的成本、毒性及后处理操作难易程度等因素，选择了甲醇∶水=97.5∶2.5为本方法的流动相体系。结果表明，此法具有较高的准确度和良好的重现性，干扰少，可用于万寿菊茎中叶黄素的含量测定。【