穿孔素在乙肝相关性肾炎的表达及意义论文

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1、穿孔素在乙肝相关性肾炎的表达及意义论文【摘要】目的：通过探测PFP在HBV相关性肾炎的肾组织的表达，以了解PFP介导的细胞毒作用在HBVGN发病中的意义.方法：10例HBVGN活检肾组织，冰冻切片采用免疫组化法（Elivision）的方法检测HBVGN肾活检组织中的perforin的表达.结果：在HBVGN肾组织内perforin在2/10的肾小球表达，3/10在肾小管阳性表达，7/10肾间质表达.Perforin在肾小球与肾间质的表达差异有统计学意义(P=0.014，P0.05).肾间质病变轻，中，重度间得Perforin表达差异无统计学意义(P0

2、.05).结论：HBVGN的发病过程中.freelerulonephritis，HBVGN）发病中的作用愈来愈受倒大家的重视.杀伤性T细胞是乙肝发病过程中引起病理损伤的重要免疫活性细胞，穿孔素(perforin,PFP)是免疫活化细胞杀伤靶细胞的主要介质之一.研究发现CD8＋CTL特异的细胞毒效应，由穿孔素介导，可以引起感染细胞损伤和死亡.如果在肾组织中发现PFP蛋白质水平的表达则能反映活化免疫细胞与肾损害的关系，我们通过检测穿孔素在HBVGN肾组织中分布，初探穿孔素在HBVGN致病过程中的作用.1对象和方法1.1对象所有病例均来自200402/2

3、00411在西安交通大学第一医院肾内科就诊的门诊和住院患者共10（男7，女3）例，平均27.5岁.均经肾穿刺活检，确诊为HBVGN者.同时排除了继发性肾小球疾病的患者.HBVGN的诊断标准如下：①血清HBV标志物阳性；②患肾小球肾炎，并除外狼疮性肾炎等继发性肾小球疾病；③肾组织切片中可找到HBV抗原（必备条件）.此标准符合《乙型肝炎病毒相关性肾炎座谈会纪要》的标准.另取5(男3，女2)例正常对照肾组织，来自因组织配型不合不宜移植的供肾体.1.2试剂鼠抗人PFP单克隆抗体为NovocastraLaboratories公司产品（产品编号：141002）.即

4、用型第二代免疫组化ElivisionTMPlus广谱试剂盒和DAB均购自福建迈新生物技术公司.1.3免疫组化法(Elivision)检测肾组织内PFP表达4μm冰冻切片，吹干，PBS冲洗3×3min，3mL/L双氧水室温下孵育10min，PBS冲洗3×3min；2mL/L羊血清处理切片，室温下30min，吸取羊血清，分别加入Ⅰ抗体（PFP稀释度1∶20），室温下孵育1h，PBS冲洗3×5min；每切片加50μL聚合物增强剂，室温下孵育20min，PBS冲洗3×3min，吸干PBS；加入Ⅱ抗，室温下孵育30min；PBS冲洗3×3min；DAB室温下显色5-1

5、0min；苏木精复染核，脱水，透明，封固.阴性对照片用PBS代替Ⅰ抗.1.4结果判断perforin抗体阳性细胞表现为胞浆内棕黄色点状或环状分布，分为肾小球及肾小管间质区域，随机计算5个肾小球横切面内表达perforin的阳性细胞数然后取平均值，即为肾小球横切面平均阳性细胞数；在肾小管间质区域随机计算5个高倍镜视野(400×)内表达perforin的阳性细胞数然后取平均值，即为该区域平均阳性细胞数.阳性强度分为0~3级(分别评分0～3分).0：无细胞着色为阴性.1：0.25细胞明显着色为弱阳性.2：0.25~0.5为阳性.3：0.5为强阳性.阴性对照组织无上

6、述阳性反应.1.5肾小管间质活动性指数肾小管间质病理改变半定量积分参照Austin［2］标准.肾小管间质病变包括：①肾小管变性、坏死；②肾间质炎症细胞浸润.以上病变根据范围及严重程度分别记0～3分.按无、轻、中、重度记0，1，2，3分.无明显病变记0分，小灶性(≤0.25)记1分，片灶性（0.25，≤0.5）记2分，弥漫性(≥0.5)记3分.肾小管间质活动性指数为（1）（2）项积分之和.轻度肾小管间质病变为1～2分，中度肾小管间质病变为3～4分，重度肾小管间质病变为5～6分.统计学处理:数据采用SPSS11.5软件进行分析处理.免疫组化半定量所得数据以中位数

7、和四分位数间距描述，等级分组资料采用秩和检验.P0.05有统计学意义.2结果Perforin在正常的肾小球，肾小管及间质均无表达（图1）.perforin在HBVGN的肾脏组织内2/10在肾小球表达，但阳性表达较弱，半定量分析以0～1分为主（图2），3/10在肾小管阳性表达（图3），阳性表达半定量评分均为：2分；7/10在肾间质表达（图4），棕黄色阳性颗粒主要表达在肾间质细胞浆内，阳性表达半定量评分中位数为2，四分位数间距为0.Perforin在肾小球与肾间质的表达差异有统计学意义(P=Elivision×1000.014，P0.05).肾间质轻，中，重度

8、兵病变间Perforin表达差异无统计学意义.3讨论