plk1基因沉默对k562-a02细胞周期、增殖和耐药性的影响论文

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1、PLK1基因沉默对K562/A02细胞周期、增殖和耐药性的影响论文.freelRNA的siRNA真核质粒，导入K562/A02细胞，用RT-PCR和）的积累量；MTT试验检测细胞对ADM的药物敏感性。结果显示.freelRNA下降（34.7±2.1）%和（56.6±1.5）%，蛋白水平下降（49.9±3.2）%和（62.1±1.7）%；转染24和48小时后，细胞存活率下降了30%和59%；转染48小时后，G2/M期细胞比例提高了2.77倍，同时细胞内ADM积累量显著提高；对ADM药物敏感性的相对率为73.8%。结论：PLK1

2、基因沉默能有效抑制K562/A02细胞生长，使细胞周期停滞在G2/M期，同时使得细胞内ADM积累量提高，对ADM敏感性增强。【关键词】PLK1基因沉默EffectofPLK1GeneSilenceonCellCycle，ProliferationandDrugResistanceinK562/A02CellsAbstractThestudyallinterferenceRNA(siRNA)targetingPolo-likekinase1(PLK1)geneoncellcycleprogression，proliferati

3、onanddrugresistanceinK562/A02cells.siRNAplasmidvectorspecificallytargetingPLK1geneRNAandproteinycin（ADM）accumulationinedbyfloetry;50%inhibitionconcentration(IC50)ofADMonK562/A02cellsinedbyMTTmethod.TheresultsshoidreducedPLK1mRNAexpressionby（34.7±2.1）%for24hoursandb

4、y（56.6±1.5）%for48hours，PLK1proteinsignificantlydecreasedsimultaneouslyby(49.9±3.2)%andby(62.1±1.7)%.Afterbeingtransfectedfor24and48hours，therateofsurvivalcellsdecreasedby30%and59%respectively.Forty-eighthoursaftertransfection，theratioofK562/A02cellsatG2/Mincreasedb

5、y2.77-fold，atthesametime，intracellularADMaccumulationincreasedandtherelativeefficiencyofK562/A02cellstoADMulation，sothatenhancecellsensitivitytoADM.Keyid;K562cell/A02cell;cellcycle;drugresistancePolo样激酶1（Polo-likekinase1，PLK1）为polo样激酶家族的成员之一，其基因由于和果蝇Polo基因序列具有高度同源性

6、，且基因编码产物表现为丝氨酸/苏氨酸激酶特性而得名。PLK1主要参与细胞有丝分裂调控：促进cyclinB/Cdc2的激活，协助中心体的功能成熟和双极性纺锤体的形成，调节促后期复合体（anaphase-promotingplex，APC）参与有丝分裂晚期事件，以及影响胞质分裂等［1］。研究发现，PLK1在多种肿瘤细胞中异常高表达，抑制其功能或表达会导致细胞周期停滞并诱导细胞凋亡，推测PLK1可能与肿瘤细胞的增殖、凋亡密切相关［2］。本研究采用小RNA干扰技术抑制K562/A02耐药细胞中PLK1的表达，分析其对细胞周期和增殖的

7、影响，并初步探讨其在逆转细胞耐药方面的可能作用。材料和方法材料细胞系人红白血病细胞系K562为华中科技大学同济医学院免疫室惠赠，经阿霉素诱导产生的耐药细胞系K562/A02购自中国医学科学院血液病研究所。主要试剂TRIZOL试剂、Lipofactamine2000和Opti-MEMⅠ购自Invitrogen公司；逆转录试剂盒、Taq酶和dNTP购自MBI公司；兔抗人PLK1多克隆抗体购自Biolegend公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体购自Pierce公司；MTT购自Amresco公司；ADM购自深圳万乐药业有限公司；碘

8、化丙锭（PI）和台盼蓝购自Sigma公司；RPMI1640和新生牛血清购自GibcoBRL公司；shRNA寡核苷酸序列和PCR引物序列由上海博亚生物有限公司合成。方法细胞培养K562，K562/A02细胞使用RPMI1640培养液（含有10%新生牛血清，100U/ml的青霉素和100μg/