plk1基因沉默对k562-a02细胞周期、增殖和耐药性的影响

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1、PLK1基因沉默对K562/A02细胞周期、增殖和耐药性的影响：刘林，张敏，邹萍，田蕾，刘芳【摘要】为了探讨小干扰RNA（siRNA）对K562/A02细胞Polo样激酶1（PLK1）基因的抑制作用及其对细胞周期、细胞增殖和耐药性的影响，将构建的针对PLK1mRNA的siRNA真核质粒，导入K562/A02细胞，用RT-PCR和）的积累量；MTT试验检测细胞对ADM的药物敏感性。结果显示，与对照组相比，转染24和48小时后，siRNA-PLK1质粒转染组的PLK1mRNA下降（34.7±2.1）%和（56.6±1.5）%，蛋白水平下降（

2、49.9±3.2）%和（62.1±1.7）%；转染24和48小时后，细胞存活率下降了30%和59%；转染48小时后，G2/M期细胞比例提高了2.77倍，同时细胞内ADM积累量显著提高；对ADM药物敏感性的相对率为73.8%。结论：PLK1基因沉默能有效抑制K562/A02细胞生长，使细胞周期停滞在G2/M期，同时使得细胞内ADM积累量提高，对ADM敏感性增强。【关键词】PLK1基因沉默　　EffectofPLK1GeneSilenceonCellCycle，ProliferationandDrugResistanceinK562/A02

3、Cells　　AbstractThestudyallinterferenceRNA(siRNA)targetingPolo-likekinase1(PLK1)geneoncellcycleprogression，proliferationanddrugresistanceinK562/A02cells.siRNAplasmidvectorspecificallytargetingPLK1geneRNAandproteinycin（ADM）accumulationinedbyfloetry;50%inhibitionconcentrati

4、on(IC50)ofADMonK562/A02cellsinedbyMTTmethod.TheresultsshoidreducedPLK1mRNAexpressionby（34.7±2.1）%for24hoursandby（56.6±1.5）%for48hours，PLK1proteinsignificantlydecreasedsimultaneouslyby(49.9±3.2)%andby(62.1±1.7)%.Afterbeingtransfectedfor24and48hours，therateofsurvivalcellsd

5、ecreasedby30%and59%respectively.Forty-eighthoursaftertransfection，theratioofK562/A02cellsatG2/Mincreasedby2.77-fold，atthesametime，intracellularADMaccumulationincreasedandtherelativeefficiencyofK562/A02cellstoADMulation，sothatenhancecellsensitivitytoADM.　　Keyid;K562cell/A

6、02cell;cellcycle;drugresistance　　Polo样激酶1（Polo-likekinase1，PLK1）为polo样激酶家族的成员之一，其基因由于和果蝇Polo基因序列具有高度同源性，且基因编码产物表现为丝氨酸/苏氨酸激酶特性而得名。PLK1主要参与细胞有丝分裂调控：促进cyclinB/Cdc2的激活，协助中心体的功能成熟和双极性纺锤体的形成，调节促后期复合体（anaphase-promotingplex，APC）参与有丝分裂晚期事件，以及影响胞质分裂等［1］。研究发现，PLK1在多种肿瘤细胞中异常高表达，抑制其

7、功能或表达会导致细胞周期停滞并诱导细胞凋亡，推测PLK1可能与肿瘤细胞的增殖、凋亡密切相关［2］。本研究采用小RNA干扰技术抑制K562/A02耐药细胞中PLK1的表达，分析其对细胞周期和增殖的影响，并初步探讨其在逆转细胞耐药方面的可能作用。　　材料和方法　　材料　　细胞系　　人红白血病细胞系K562为华中科技大学同济医学院免疫室惠赠，经阿霉素诱导产生的耐药细胞系K562/A02购自中国医学科学院血液病研究所。主要试剂TRIZOL试剂、Lipofactamine2000和Opti-MEMⅠ购自Invitrogen公司；逆转录试剂盒、Ta

8、q酶和dNTP购自MBI公司；兔抗人PLK1多克隆抗体购自Biolegend公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体购自Pierce公司；MTT购自Amresco公司；ADM购自深圳万乐药业有限公司；碘化丙锭（