人参多糖对hcg诱导黄体与颗粒细胞功能的影响

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1、人参多糖对HCG诱导黄体与颗粒细胞功能的影响作者：孙艳，冯立，王洪军，年春志，禇征，王立强，张志强，吴益民【摘要】目的研究人参多糖对大鼠卵巢功能的作用。方法采用体外细胞培养观察人参多糖对HCG诱导的黄体与颗粒细胞分泌孕酮与cAMP的影响，并检测了卵母细胞的存活率。分离培养黄体、颗粒与卵母细胞，设对照组与不同浓度人参多糖实验组，采用放免分析方法测定孕酮与cAMP生成含量，细胞存活率检测采用MTT法。结果与对照组比较，孕酮含量：黄体细胞为（6573.46±185.14）与(4509.55±126.82)pmol，颗粒细胞为（197.16±42.87）与(320.42±12.46)pmo

2、l。cAMP：黄体细胞为（31.20±17.13）与(65.26±15.93)fmol，颗粒细胞为(121.15±19.96)与(296.42±27.28)fmol。结论人参多糖抑制HCG诱导黄体细胞孕酮分泌，促进HCG诱导颗粒细胞孕酮分泌。而协同黄体细胞与颗粒细胞cAMP生成，人参多糖使卵母细胞生长抑制率降低，呈区间剂量依赖关系。【关键词】人参多糖；孕酮；环腺苷酸；人绒毛膜促性腺激素　　TheEffectofGinsengPolysugaronSecretionFunctionofLutealandGranuloseCellofRatinvitro　　Abstract：Objec

3、tiveTostudyusingofginsengpolysugaronsecretionfunctionoffemaleratovary.TheexperimenthadobservedprogesteroneandcAMPbyHCGinducinglutealandgranulosecellasicroscope,progesteroneandcAMPcontentinedbyradioimmunoassaykit(RIAkit).CellexistrateofoocyteinedbyMTTol.Thegranulosecelltestgroupspareol.cAMP:the

4、lutealcelltestgroupspareol，thegranulosecelltestgroupspareol.ConclusionThistreatisehaddemonstratedthatginsengpolysugarcaninhibitHCGinducingprogesteronesecretionandenhancingcAMPcontentoflutealandgranulosecellofrat,ginsengpolysugarhasloa公司；小牛血清购自上海生物工程公司；孕马血清购自天津实验动物中心；人参多糖由吉林大学化学教研室惠赠（2g/L）；3H-孕

5、酮购自上海生物制品研究所；125I-cAMP放免药盒购自上海中医学院，二甲苯、PPO，POPOP，HCI，NaOH等购自沈阳化学试剂公司，均为分析纯；CO2培养箱：美国Shel-Lab公司，型号1815TC；超净工作台：江苏苏州安泰空气技术有限公司，型号SoCoy's5a培养液，混匀，200r/min，离心2min。弃沉淀，1300r/min，离心10min，弃上清，加入培养液10ml，1300r/min，离心10min，洗2次。加新培养液，混匀，取50μl，再加50μl0.4%台盼蓝，细胞计数，计算细胞总数与活细胞百分率。用5%胎牛血清MoCoy's5a培养液调至30万细胞/0.

6、5ml，加入人参多糖（30ng/ml），接种24孔培养板，5%CO2，95%通气，37℃培养24h，0.5ml无血清MoCoy's5a培养液洗1次，加含有人参多糖0.9～1ml无血清培养液，24h后，换液，洗1次。加无血清培养液1ml，设对照组与人参多糖实验组，将含有人参多糖的培养液细胞培养48h，收集培养液，煮沸5min，-20℃存放，用于孕酮与cAMP放免测定。　　2.1.2颗粒细胞的制备与培养将雌性大鼠腹部皮下注射去氢已烯雌酚油剂0.5mg/0.1ml/只，连续注射4d，第5天后，动物断头处死，无菌取卵巢，将用去氢已烯雌酚油剂处理的大鼠卵巢用小号针头（41/2）刺破卵泡，释放

7、出颗粒细胞。离心，收细胞，加适量培养液，取50μl，加50μl0.4%台盼蓝，计数细胞数与活细胞百分率。活细胞一般在40%～60%之间。按活细胞数用5%胎牛血清MoCoy's5a培养液调至30万细胞/0.5ml,加入人参多糖，接种24孔培养板24h，用无血清培养液洗1次，设37℃对照组与人参多糖实验组，将含有人参多糖的培养液细胞培养24h，收集培养液，煮沸5min，-20℃存放，用于孕酮、cAMP的放免测定。　　2.1.3卵母细胞的制备与培养将雌性大鼠颈部皮下注射孕马