hplc法测定银黄片中绿原酸的含量

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1、HPLC法测定银黄片中绿原酸的含量【摘要】目的:建立银黄片中绿原酸含量的测定方法。方法:以十八烷基键合硅胶为固定相，甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15:95:1:0.3）为流动相，检测波长为324nm，外标法测定。结果:绿原酸进样量在0.0824～0.824μg之间，呈良好的线性关系，r=0.9999，平均回收率为99.39%，RSD为0.71%。结论:HPLC法测定银黄片中绿原酸含量快速、简便、准确、可靠。【关键词】高效液相色谱法（HPLC）;银黄片;绿原酸　　银黄片是由金银花、黄芩提取物经加工而成的制剂，具有清热

2、解毒、消炎之功，主要用于治疗呼吸道感染、咽炎等症。本文采用HPLC法测定银黄片中金银花的主要成分绿原酸含量，以对其含量进行监控。　　1仪器和试药　　日本岛津LC-10A型高效液相色谱仪;SPA-10紫外检测器;色谱工作站。绿原酸对照品:中国生物制品检定所，批号:0753-200212;银黄片，本厂试生产，批号:20050910。甲醇为色谱纯，冰醋酸、三乙胺均为化学纯。　　2方法与结果　　2.1色谱条件与系统适用性实验色谱柱为Z00BAX（4.6mm×250mm）;流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15:85:1:

3、0.3）;检测波长324nm;柱温为室温;流量:1ml.min;理论板数按绿原酸计应不低于3500。　　2.2供试品溶液的制备取本品研细，精密称取0.1g，置100ml量瓶中，加水约80ml，超声处理15min，放冷，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。　　2.3对照品溶液的制备称取绿原酸对照品适量，加水制成每ml含0.04mg的溶液，即得。　　2.4线性范围的考察称取绿原酸对照品10.78mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。分别精密

4、吸取此溶液各2、4、8、12、16、20μl分别注入液相色谱仪，测定。以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图。回归方程为:y=-23.4196-3045.86x;r=0.9999，结果表明绿原酸进样量在0.0824～0.824μg之间，进样量与峰面积分呈良好的线性关系。　　2.5精密度实验精密吸取同一批供试品溶液10μl，重复进样5次，计算相对偏差，绿原酸的RSD为2.9367%。　　2.6绿原酸的含量测定取批号为20050910的银黄片适量，共5份，精密称定，制备供试品溶液，测定出银黄片中绿原酸的含量（%）分

5、别为3.95、3.93、3.87、3.94、3.88，平均值为3.91;RSD为0.93%。　　2.7稳定性实验密吸取供试品溶液10μl，按0、2、4、6、8h进行分析，测定色谱峰面积，分别为842.13、841.71、870.70、876.93、846.12，平均值为855.52;RSD为1.98%。测定结果显示，供试品溶液制备后8h内测定，绿原酸色谱峰面积无明显变化，说明在此时间内，供试品溶液化学性质稳定。　　2.8加样回收率实验精密称取已知准确含量（13.92mg.g）的样品（批号20050910）0.1g

6、，加入绿原酸对照品溶液（C=1.343mg.ml）2ml，按样品含量测定方法操作，结果x=99.39%，RSD=0.71，见表1。　　表1绿原酸含量测定回收率实验结果（略）　　2.9样品中绿原酸的含量测定取样品，按方法测定样品中绿原酸含量，结果及色谱图如下:批号:20050910、20050911、20050912中每片绿原酸的含量（mg）分别为3.91、4.23、3.88，平均为4.01。　　3小结　　参照《中华人民共和国药典》［1］一部金银花药材含量测定的检验方法，用十八烷基键合硅烷胶为填充剂，分别配制不同的

7、流动相。确定甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（15:85:1:0.3）;检测波长324nm;柱温:室温;流量:1ml.min;理论板数按绿原酸计应不低于3500。　　本文采用HPLC法测定绿原酸含量，方法简便、可靠，重现性好，可有效控制药品质量［2-3］。【参考