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《吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制胆固醇诱导的人肝细胞c反应蛋白的表达》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、吡咯烷二硫代氨基甲酸盐抑制胆固醇诱导的人肝细胞C反应蛋白的表达：唐俊利，徐海燕，刘喜平，钱民章【摘要】目的研究核因子κB(NF-κB)信号通路阻断剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对胆固醇诱导的人肝细胞C反应蛋白(C-reactiveprotein,CRP)表达的影响。方法培养肝细胞L-02并将其分为3个组，即胆固醇作用组、PDTC+胆固醇作用组和对照组，分别作用细胞48h。采用ethodsHumanhepatocytecelllineL-02munoturbidimetryassaysulatedCRPgeneexpress
2、ioninL-02(P<0.05)paredg/L,12.5mg/L,25.0mg/L,50.0mg/L,respectively)decreasedsignificantly.ConclusionCholesterolinducedL-02CRPgeneexpression.CRPgeneexpressiondecreasedsignificantlyafterPDTCapplication，ightbeinvolvedinthecholesterolinducedC-reactiveproteingeneexpress
3、ioninL-02cellline. KEYI-1640培养基购自Gibco公司；胎牛血清、CRP免疫比浊试剂盒购自华美公司；胆固醇、PDTC购自Sigma公司；CRP标准品、IL-6等购自晶美公司；山羊抗人CRP一抗、兔抗人actin一抗购自SantaCruz。 1.2L-02细胞的培养 L-02细胞按常规方法培养。消化计数后以1×106个/mL的密度种于6孔板，每孔用2mL含10%(体积分数)FBS的RPMI-1640培养基培养24h后，换1mL无血清RPMI-1640培养基培养24h，后按实验分组情况对细胞进行处理。
4、 1.3实验分组及处理 实验分为3组：胆固醇作用组分别以6.25(ch1)、12.5(ch2)、25.0(ch3)、50.0(ch4)mg/L的胆固醇作用人肝细胞L-02；PDTC+胆固醇作用组采用100μmol/LPDTC预处理细胞60min，后分别以6.25、12.5、25.0、50.0mg/L的胆固醇作用人肝细胞L-02；阳性对照使用质量浓度为50μg/L的IL-6作用人肝细胞L-02，阴性对照组采用1%(体积分数)FBS的RPMI-1640加0.2%(体积分数)无水乙醇作用人肝细胞L-02。各组作用细胞48h后收集细
5、胞培养液及细胞。 1.4Westernblot检测肝细胞L-02内CRP的表达 细胞经药物作用48h后，吸出细胞培养液，用PBS冲洗细胞，再加入细胞裂解液裂解细胞，提取胞内总蛋白，小部分用Lorry氏法测定蛋白浓度。经电泳、电转、封闭后分别与CRP及actin的一抗和二抗作用，最后采用化学发光法检测目的条带，用图像分析仪拍照并测定各显色条带的吸光度。以各组CRP/actin吸光度的比值计为CRP蛋白表达的相对含量。 1.5免疫比浊法检测细胞培养液中CRP的含量 细胞培养液收集后，采用CRP免疫比浊试剂盒，经全自动生化分析
6、仪进行测定。 1.6统计学处理 采用SPSS统计分析软件处理实验数据。所得数据以均数±标准差(±s)表示，差异显著性检验用方差分析，P<0.05示差异有统计学意义。 2.2免疫比浊法检测细胞培养液中CRP结果 用相同浓度的PDTC(100μmol/L)作用细胞1h，再加入不同浓度的胆固醇作用48h后，采用免疫比浊法检测肝细胞培养液中CRP含量，结果显示PDTC能降低胆固醇诱导的L-02CRP基因表达(P<0.05)，与olstad等［11-12］证实NF-κB以多种方式参与CRP的表达调控。最近的研究表明，C
7、-Rel通过与C/EBPbeta互作，以增强C/EBPbeta与CRP基因启动子区的结合，从而激活CRP的表达［12］。Agraol/L的PDTC作用细胞1h后再加入不同浓度的胆固醇作用48h，ed,1999,340(2):115-126. ［3］KovacsA,TornvallP,NilssonR,etal.HumanC-reactiveproteinsloentinamousemodelan-likehypercholesterolemia［J］.ProcNatlAcadSciUSA,2007,104(34):13768-
8、13773. ［4］RidkerPM,StampferMJ,RifaiN.Novelriskfactorsforsystemicatherosclerosis:aparisonofC-reactiveprotein,fibrinogen,homocystein
