不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定

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1、第42卷第2期上海师范大学学报(自然科学版)Vol．42，No．22013年4月JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences)Apr．，2013不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定冯慧琴1，杨明俊1，杨晓彤1，杨庆尧2*(1．上海师范大学生命与环境科学学院，上海200234;2．上海芝草生物技术有限公司，上海200234)摘要:建立不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定方法．灵芝样品用乙醇提取，依次经氯仿、5%碳酸氢钠萃取，酸化后再

2、用氯仿萃取、浓缩至干，称重，即得灵芝总三萜酸量．结果:灵芝子实体总三萜酸为(8．58±0．25)mg/g，孢子粉为(3．48±0．03)mg/g，菌丝体仅为(1．75±0．09)mg/g;菌盖总三萜酸含量为(12．62±0．22)mg/g，菌柄为(7．66±0．08)mg/g．10批次灵芝子实体的总三萜酸含量范围为4．3416．39mg/g．灵芝子实体提取物中的总三萜酸含量以醇－水提取物的最高为(208．70±5．54)mg/g;碱水提取物的最低，仅为(123．07±4．99)mg/g．HPLC初步

3、分析子实体和孢子及子实体提取物间三萜酸成分大部分相同．本法适用于灵芝子实体及其提取物、灵芝孢子和菌丝体总三萜酸的含量测定，结果可靠，可为灵芝产品质量指标提供依据．关键词:灵芝;总三萜酸;子实体;孢子;菌丝体;提取物中图分类号:．7文献标识码:A文章编号:1000-5137(2013)+Q949．32902-0192-05灵芝Ganodermalucidum(LeyssexFr．)Karst是我国著名的药用真菌，其中三萜化合物是灵芝的主要活性成分，据报导从灵芝子实体、孢子及菌丝体中分离的三萜化合物已约

4、［1－5］，它们具有抑制160种［2，6－7］，因此肿瘤、保护肝脏、抗氧化、免疫调节、抑制胆固醇合成、抗菌、抗炎、抗病毒等广泛的药理活性三萜化合物的含量是灵芝产品品质鉴定的重要指标．用HPLC方法定量分析灵芝三萜酸成分，丁平［8］测定了灵芝不同部位中灵芝酸B的含量，马林［9］测定灵芝中孢子酸A、赤芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C的含量，马利金10］分析红芝中灵芝酸［AC3种成分的含量．本实验参照［11］分离灵芝酸和赤TsuyoshiNishitoba芝酸方法，测定了不同部位灵芝及子实体提取物的总三萜酸含量

5、，而非三萜酸中某一或几个成分．1材料与方法1．1材料灵芝子实体(GL-F)和孢子(GL-S)产自金寨;另10批灵芝子实体市购;灵芝菌丝体:液体培养，本所提供;灵芝水提取物(GL-WW);灵芝水醇提取物(GL-WA);灵芝醇水提取物(GL-AW);灵芝碱水提取物(GL-LW)，本所提供;氯仿、碳酸氢钠、乙醇、氢氧化钠、盐酸均为国产分析纯．1．2灵芝总三萜酸的制备取灵芝子实体粉末或孢子或菌丝体10g，或灵芝子实体提取物2g，精确称重，加100mL水超声5收稿日期:2012-11-02基金项目:上海师范大

6、学横向基金项目(C－6105－09－DL0703)作者简介:冯慧琴(1965－)，女，上海师范大学微生物与免疫学研究所副研究员;杨庆尧(1936－)，男，上海师范大学生命与环境科学学院教授．*通信作者第2期冯慧琴，杨明俊，杨晓彤，等:不同部位灵芝及子实体提取物中总三萜酸含量测定193min，加95%乙醇100mL，30℃磁力搅拌30min，过滤，获醇提取液1;残渣加200mL50%乙醇，30℃磁力搅拌30min，过滤，得醇提取液2，合并醇提取液1、2并浓缩，浓缩液加50mL氯仿萃取，重复3次，氯仿萃

7、取液中加50ml5%NaHCO3萃取，重复3次，液用NaHCO32mol/LHCl调pH至3，在酸性溶液中加氯仿50mL进行萃取，重复3次，酸性氯仿萃取液合并浓缩至干，放置干燥器内24h，即得灵芝总三萜酸，精确称重，计算:灵芝总三萜酸含量=灵芝总三萜化酸重量(mg)/样品重量(g)．1．3灵芝总三萜酸的HPLC条件采用BechmanSystemGold高效液相色谱系统，包括125液相泵和168DAD检测器．色谱柱:Hyper-silGoldC18(250mm×4．6mm，5μm);流动相:2%乙酸∶

8、乙腈=2∶1;流速:1．0mL/min;检测波长:252nm;进样体积:20μL;柱温:27℃．2结果2．1灵芝不同部位的总三萜酸含量比较分别取灵芝子实体(GL-F)、孢子(GL-S)、液体培养菌丝体(GL-M)、子实体中的菌盖(GL-P)和菌柄(GL-ST)，粉碎后按1．2方法制备，计算灵芝总三萜酸含量．结果显示GL-F含总三萜酸(8．58±0．25)mg/g，GL-S的总三萜酸含量为(3．48±0．03)mg/g，而GL-M的总三萜酸含量最少，仅有(1．75±0．