不同配比冻存液对兔脂肪干细胞液氮冻存效果的研究

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1、不同配比冻存液对兔脂肪干细胞液氮冻存效果的研究［摘要］目的：探宄不同浓度配比冻存液对脂肪干细胞(Adipose-derivedStemCells,ADSCs)冻存复苏后存活率及增殖活性的影响。方法：无菌条件下取新西兰大白兔的脂肪组织，体外分离、培养ADSCs并传代至第3代，行免疫细胞化学染色对其表面标志物进行鉴定，同时对其行成软骨及成表皮细胞诱导以证实其多项分化能力。将第3代ADSCs置于液氮(-196°C)中冻存，根据冻存液中培养基(DMEM)、胎牛血清(Fetalbovineserum,FBS)及二甲基亚砜(Di

2、methylsulfoxide,DMSO)的配比不同分为8组：①含不同浓度FBS配比分组：A组(70%DMEM+20%FBS+10%DMSO)、B组(60%DMEM+30%FBS+10%DMSO)、C组(50%DMEM+40%FBS+10%DMSO)、D组(含有40%DMEM+50%FBS+10%DMSO);②含不同浓度DMSO配比分组:E组(55%DMEM+40%FBS+5%DMSO)>F组(50%DMEM+40%FBS+10%DMSO)、G组(45%DMEM+40°/oFBS+15%DMSO)>H组(40%DME

3、M+40%FBS+20%DMSO)。细胞冻存三个月后，对其进行复苏并观察细胞形态学变化；通过细胞计数计算细胞存活率；采用MTT法绘制复苏后细胞生长曲线，以测定其生长增殖情况。结果：细胞复苏后，通过细胞计数计算结果显示C、D组存活率明显高于A、B组(P0.05)o结论：从兔脂肪组织中成功分离出了ADSCs，并且能在体外培养过程中稳定生长，快速增殖；ADSCs冻存液比例选择以DMEM:FBS：DMS0=5：4:1的冻存效果最好。［关键词］脂肪来源干细胞；冻存液；液氮［中图分类号］Q813.1［文献标志码］A［文章编号］1

4、008-6455(2015)09-0029-05Abstract：ObjectiveToinvestigatetheabilitytomaintaintheproliferationofAdipose-derivedStemCells(ADSCs)indifferentconcentrationratiooffrozenliquid.MethodsFatisolatedfromhealthyrabbitswasisolated，culturedandthengeneratedinvitrofor3passageint

5、otheADSCs，P3ADSCswereidentifiedbydetectingofadiposestemcellsurfacemarkersexpression.Thethirdpassagecellswerepreservedinliquidnitrogenfor3months,ADSCsweredividedintoeightgroupinordertocryopreservation：groupA：70%DMEM+20%FBS+10%DMSO,groupB：60°/oDMEM+30%FBS+10%DMSO

6、,groupC：50%DMEM+40%FBS+10%DMSO,groupD：40°/oDMEM+50%FBS+10%DMSO,groupE：55°/oDMEM+40%FBS+5°/oDMSO,groupF：50%DMEM+400/oFBS+10%DMSO,groupG：45%DMEM+400/oFBS+150/oDMSO,groupH：40%DMEM+40%FBS+20%DMSO.Aftercryopreservationthreemonths，observedthecellsafterrecovering，andc

7、omparedwiththegroupnotfrozen.ThegrowthcurvesofthecryopreservedcellswereanalyzedbyMTTassay.ResultsTheresultsofimmunocytochemistryshowedADSCswerenegativeforCD34，CD106andpositiveforCD29，CD44.TrypanbluestainingandmicroscopiccountingofresultsshowedthatGroupCandGroup

8、DhadhighercellsurvivalratethanGroupAandGroupBwithsignificantdifference(P0.05)•ConclusionAnexperimentsuccessfullyseparatedfromthefatrabbitadiposetissuestemcellsculturedinvitr