脐血造血干细胞短时间冻存效果验证.doc

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1、脐血造血干细胞短时间冻存效果验证摘要为了验证脐血造血干细胞短时间冻存的有效性，使用羟乙基淀粉沉降去除脐血中的红细胞，淋巴细胞分离液获取脐血单个核细胞，流式细胞仪测定CD34+细胞纯度，从而获得将含有HSC的脐血单个核细胞用冻存液悬起，并将单个核细胞以2×107个／ml的冻存密度冻存在2ml冻存管中，立即放入装有异丙醇的程序降温盒中，并将冻存盒放入-80℃冰箱中进行程序降温，五小时后转入液氮冻存。分别在冻存1个月、2个月、3个月进行复苏，并做台盼蓝活率检测、流式细胞仪测定CD34+细胞纯度。结果:三个月内细胞复苏率和台盼蓝活率

2、检测没有显著变化，液氮可以有效地短时间冻存脐血造血干细胞。关键词：脐血；造血干细胞；冻存；复苏UmbilicalcordbloodhematopoieticstemcellscryopreservedshorttimeeffectvalidationAbstractInordertoverifytheeffectivenessofcryopreservedcordbloodhematopoieticstemcellsforshortperiodsoftime,removetheredbloodcellsintheumbili

3、calcordblood,usinghydroxyethylstarchsubsidenceMethods:hydroxyethylstarchsubsidence,removetheredbloodcellsintheumbilicalcordbloodlymphocyteseparationmediumforumbilicalcordbloodmononuclearcells,flowcytometryinstrumentdeterminationofpurityofCD34+cells.Tousingumbilical

4、cordbloodmononuclearcellsoffreeze-storedliquidsuspension,andmononuclearcellsto2x107/mloffrozenstoragedensityfrozentubein2mlofcryopreserved,immediatelyintotheprogramwithisopropylalcoholandcoolingbox,andthefrozendepositboxinthe-80℃programstocoolintherefrigerator,afte

5、rfivehoursintoliquidnitrogenfrozenstorage.Incryopreserved1month,2months,3monthsforrecovery,andtrypanblueliveratedetection,flowcytometryinstrumentdeterminationofpurityofCD34+cells.Results:Threemonthscellrecoveryratedidnotchangesignificantlyandtrypanblueliveratedetec

6、tion,liquidnitrogencryopreservedcordbloodhematopoieticstemcellscanbeeffectivelyforshortperiodsoftime.Keywords:umbilicalcordblood;Hematopoieticstemcell;Frozenstorage;recovery前言脐带血及脐血单个核细胞（cordbloodmononuclearcells,CB-MNC）：脐带血是胎儿娩出、脐带结扎并离断后残留在胎盘和脐带中的血液，通常是废弃不用的。近十几年的

7、研究发现，脐带血中含有大量的脐血单个核细胞，脐带血MNC中含有可以重建人体造血和免疫系统的造血干细胞，可用于造血干细胞移植，治疗多种疾病。因此，脐带血MNC已成为造血干细胞的重要来源，特别是无血缘关系造血干细胞的来源。也是一种非常重要的人类生物资源。脐血造血干细胞(Cordbloodhematopoieticstemcells,CB-HSC)：CD34是最常用的分离造血干细胞的标志。CD34+干细胞主要存在于骨髓和脐带血中，因其具有自我更新、多种分化能力和广阔的应用前景而备受关注[1]脐血移植(cordbloodtransp

8、lantation，CBT)近年来在国内外得到迅速发展，临床实践表明CBT是治疗白血病、恶性淋巴瘤及重型海洋性贫血等多种疾病的有效方法[2]。由于脐血来源充足，采集方便，对母亲及胎儿无危害，HLA配型要求不高，脐血中含有丰富的造血干细胞及免疫活性细胞，脐血已经成为骨髓造血干细胞的重要补充，