-80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究

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1、-80℃冻存外周血造血干细胞的应用研究作者：袁成录，史春雷，王玲，李颖，黄梅娟，王媛媛，高岱清【关键词】造血干细胞移植；,,外周血干细胞；,,冻存方法　　摘要：目的：探求一种操作简便实用、造血干细胞回收率和存活率高、成本低的外周血造血干细胞的冻存方法。方法：CP-1和5%白蛋白作保护剂在80℃条件下直接冻存，并检测冻存前后外周血干细胞的活性，单个核细胞（MNC）和CFU-GM、CD34+细胞的回收率。结果：冻存前后外周血干细胞活性，单个核细胞（MNC）和CFU-GM、CD34+细胞的回收率无明显差异（P＞0.05）,输注后造血均

2、重建。结论：CP-1和5%白蛋白作保护剂在80℃条件下直接冻存干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法，具有广泛的临床推广价值。　　关键词：造血干细胞移植；外周血干细胞；冻存方法　　StudyontheFreezingProceduretoStorePeripheralBloodStemCellsat-80℃　　Abstract：Objective：Toseekaconvenient,practical8freezingprocedurewithhighrecoveryrateandsurvivalrateas

3、wellaslowcosttostoreperipheralblood(PB)stemcells.Method：ThePBstemcellswerefrozeat80℃directlywithCP-1and5%albuminasprotectiveagents.TheactivityofPBstemcellsandrecyclerateofmononuclearcell(MNC),CFU-GMandCD34+cellsbeforeandafterfreezingweredetected.Result：TheactivityofP

4、BstemcellsandrecoveryrateofMNC,CFU-GMandCD34+cellshavenosignificantdifferencesbeforeandafterfreezing（P＞0.05）.Hemopoiesiscouldbereconstructedafterinfusionall.Conclusion：Freezingstemcellsdirectlyat80℃byusingCP-1and5%albuminasprotectiveagentsisaconvenient,reliable,safea

5、ndlowcostproceduretostorePBstemcells,whichhasthepossibilitytobeusedinclinicalwidely.　　Keywords：Bloodstemcelltransfusion；Peripheralbloodstemcells；Freeze-saving　　以CP-1和5%白蛋白作干细胞保护剂直接80℃冰箱冻存外周血干细胞是一种简便、可靠、安全、成本低的外周血干细胞冻存方法，在造血干细胞移植（HCT）中已广泛应用。我科为14例病人所做的66次外周血干细胞冻存均采用以上

6、方法，取得良好效果，现报告如下。8　　1资料与方法　　1.1研究对象：2003年10月至2005年10月，进行外周血造血干细胞移植的病人14例，男8例，女6例；年龄13～53岁，平均42.5岁。急性淋巴细胞白血病（ALL）4例，急性非淋巴细胞白血病（ANLL）4例，非霍奇金淋巴瘤（NHL）4例，霍奇金淋巴瘤（HD）1例，多发性骨髓瘤（MM）1例。　　1.2外周血造血干细胞动员及采集：所有病人均采用自体外周血造血干细胞移植，采用MAG（米托醌、阿糖胞苷+粒细胞集落刺激因子）方案动员。米托醌8～10mg/×2d，阿糖胞苷2g/×3d

7、，当联合化疗后白细胞下降到最低开始回升时应用粒细胞集落刺激因子（G-CSF），5～10μg/kg/d皮下注射，当白细胞＞5.0×109/L时开始采集，应用CS-3000细胞分离机采集外周血干细胞，血循环量为10l/次，采集次数为1～2次，获得外周血干细胞的MNC中位数为4.5(3.0～6.9)×108/kg,CD34+细胞中位数5.2(4.2～18.9)×106/kg,CFU-GM为2.7(1.6～10.9)×105/kg。　　1.38外周血干细胞冻存：用CP-1（日本麒麟公司提供）和20%白蛋白配成冷冻液，与采集的干细胞混合，

8、白蛋白的终浓度均为5%，然后分装于冷冻袋（50ml/支，美国百特公司）中，留取少许标本送检：胎盼蓝染色、MNC计数、CD34+细胞和CFU-GM检测。平放于冷冻夹中，直接放入-80℃冰箱（日本三洋公司）中保存。　　1.4解冻回输：回输前将冷冻袋从-80℃冰箱中取