当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后fak表达的

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1、当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后FAK表达的【摘要】目的：观察当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞内FAK的表达及临床的意义。方法:将35只SD大鼠随机分成4组(n=10):正常对照组(n=5);假手术组(n=10);缺血再灌注组(n=10);当归治疗组(n=10),建立在体心肌缺血再灌注动物模型。实验完毕后，将各组动物心肌组织做免疫组织化学染色;观察各组动物心肌细胞内粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)表达的变化。利用HPIAS2000图像分析系统测定FAK在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：正常对照组：心肌细胞内

2、可见大量的棕黄色颗粒沉积，FAK表达呈阳性;假手术组：心肌细胞内可见一些棕黄色颗粒，FAK表达呈阳性;缺血再灌注损伤组：心肌细胞内可见少量和未见棕黄色颗粒，FAK表达呈阴性;当归治疗组：心肌细胞内可见密集分布的棕黄色颗粒，FAK表达呈阳性。图像分析结果显示：正常对照组、当归治疗组、假手术组与缺血再灌注损伤组之间FAK表达的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01);正常对照组与假手术组之间、当归治疗组与假手术组之间FAK表达的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>005)。结论：当归注射液对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞有重要的保

3、护作用。【关键词】当归注射液;缺血再灌注;心肌;FAK缺血再灌注损伤(Ischemiareperfusioninjury)或称再灌注损伤,是指组织缺血一段时间,当血流重新恢复后,细胞功能代谢障碍及结构破坏反而较缺血时进一步加重,器官功能进一步恶化的综合征[1]。缺血是供血障碍引起的组织供血不足的病理表现,组织缺血导致的疾病称缺血性疾病,是可以发生在多种组织器官上的常见疾病。再灌注是指组织缺血后恢复供血的过程,缺血再灌注实际上包括缺血和再灌注两个方面,缺血是引起疾病的原因,也是再灌注的条件[2]。　　当归为伞形科(Umbrelliferae)植物的干燥块根,

4、药性甘、辛、温,入肝、心、脾经,具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效[3]。当归中含有19种氨基酸,23种微量元素及维生素A、维生素B、磷脂等物质[4]。当归的药用价值早已为人们所认识,其药理作用主要是：①促进机体免疫;②对呼吸系统的作用;③对血液循环系统的作用，有文献报道[2]。冠心病患者应用当归注射液治疗能平衡和抑制血小板聚集的作用。当归具有钙通道阻滞作用,拮抗钙超载,对心肌缺血再灌注所致心肌损伤有保护作用。中药对心肌缺血的治疗有其独特性和有效性，尤其是中药具有毒副作用小、效果确切的特点[5]。近年来，有不少学者对中药预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用

5、进行了研究与探索。　　FAK是一种非受体型酪氨酸激酶,与酪氨酸激酶2(prolinerichtyrosinekinase2,PYK2)及细胞黏着激酶β(cellularadhesionkinaseβ,CAKβ)组成FAK家族[6]。FAK抑制细胞凋亡[7]。FAK是锚定依赖细胞的生存信号,肿瘤细胞FAK表达受到抑制时,可引起细胞凋亡。癌细胞FAK表达的升高,通过抑制锚定依赖状态下的细胞凋亡而进行不断的生长[8]。FAK的高表达能使细胞外存活信号不断放大,抑制肿瘤细胞失去细胞黏附后的失巢凋亡,促进肿瘤细胞增殖和迁移。　　本实验采用免疫组织化学方法观察当归注射液对

6、缺血/再灌注过程心肌细胞内FAK的表达,探讨当归注射液对心肌缺血/再灌注损伤的作用机理。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物模型制备及分组选用健康雄性g·(100g)-1,麻醉动物后行气管切开接微型呼吸机人工呼吸[呼吸频率60次·min-1,潮气量2ml·(100g)-1],沿胸骨左缘第4肋骨开胸在左心室、右心室与左心房交界处结扎/开放左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型。将动物随机分成4组:正常对照组(不做任何处理);假手术组(丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎);缺血再灌注损伤组(IR)(缺血/再灌注前静脉注射生理盐水0.8ml/kg，结扎左冠状

7、动脉前降支45min,再灌注120min);当归注射液预处理组(在结扎前20min，静脉注射当归注射液0.8ml/kg,其它处理同缺血/再灌注组)。　　1.2主要试剂　　25%当归注射液(武汉大学中南医院制药厂);即用型兔抗鼠FAK单克隆抗体，即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸。以上试剂均购于北京中山生物技术有限公司。　　1.3方法　　1.3.1常规HE染色取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。　　1.3.2免疫组织化学SP法检测FAK相关抗原主要步骤：5μm组织切片常规脱蜡至水，3%过氧化氢处理10min以抑制内源

8、性过氧化物酶活性，Ki67均采用高压