当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后FAK表达的研究

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1、当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后FAK表达的研究【摘要】目的：观察当归注射液对缺血再灌注损伤心肌细胞内FAK的表达及临床的意义。方法:将35只SD大鼠随机分成4组(n=10):正常对照组(n=5);假手术组(n=10);缺血再灌注组(n=10);当归治疗组(n=10),建立在体心肌缺血再灌注动物模型。实验完毕后，将各组动物心肌组织做免疫组织化学染色;观察各组动物心肌细胞内粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)表达的变化。利用HPIAS2000图像分析系统测定FAK在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：正常对照组：心肌细胞内可

2、见大量的棕黄色颗粒沉积，FAK表达呈阳性;假手术组：心肌细胞内可见一些棕黄色颗粒，FAK表达呈阳性;缺血再灌注损伤组：心肌细胞内可见少量和未见棕黄色颗粒，FAK表达呈阴性;当归治疗组：心肌细胞内可见密集分布的棕黄色颗粒，FAK表达呈阳性。图像分析结果显示：正常对照组、当归治疗组、假手术组与缺血再灌注损伤组之间FAK表达的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01);正常对照组与假手术组之间、当归治疗组与假手术组之间FAK表达的平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>005)。结论：当归注射液对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞有重要的保护作用。

3、【关键词】当归注射液;缺血再灌注;心肌;FAK缺血12再灌注损伤(Ischemiareperfusioninjury)或称再灌注损伤,是指组织缺血一段时间,当血流重新恢复后,细胞功能代谢障碍及结构破坏反而较缺血时进一步加重,器官功能进一步恶化的综合征[1]。缺血是供血障碍引起的组织供血不足的病理表现,组织缺血导致的疾病称缺血性疾病,是可以发生在多种组织器官上的常见疾病。再灌注是指组织缺血后恢复供血的过程,缺血再灌注实际上包括缺血和再灌注两个方面,缺血是引起疾病的原因,也是再灌注的条件[2]。　　当归为伞形科(Umbrelliferae)植物的干燥块根,药性甘、辛

4、、温,入肝、心、脾经,具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效[3]。当归中含有19种氨基酸,23种微量元素及维生素A、维生素B、磷脂等物质[4]。当归的药用价值早已为人们所认识,其药理作用主要是：①促进机体免疫;②对呼吸系统的作用;③对血液循环系统的作用，有文献报道[2]。冠心病患者应用当归注射液治疗能平衡和抑制血小板聚集的作用。当归具有钙通道阻滞作用,拮抗钙超载,对心肌缺血再灌注所致心肌损伤有保护作用。中药对心肌缺血的治疗有其独特性和有效性，尤其是中药具有毒副作用小、效果确切的特点[5]。近年来，有不少学者对中药预处理对心肌缺血再灌注损伤的保护作用进行了研究与探索

5、。　　FAK是一种非受体型酪氨酸激酶,与酪氨酸激酶2(prolinerichtyrosinekinase2,PYK2)及细胞黏着激酶β(cellularadhesion12kinaseβ,CAKβ)组成FAK家族[6]。FAK抑制细胞凋亡[7]。FAK是锚定依赖细胞的生存信号,肿瘤细胞FAK表达受到抑制时,可引起细胞凋亡。癌细胞FAK表达的升高,通过抑制锚定依赖状态下的细胞凋亡而进行不断的生长[8]。FAK的高表达能使细胞外存活信号不断放大,抑制肿瘤细胞失去细胞黏附后的失巢凋亡,促进肿瘤细胞增殖和迁移。　　本实验采用免疫组织化学方法观察当归注射液对缺血/再灌注过程心

6、肌细胞内FAK的表达,探讨当归注射液对心肌缺血/再灌注损伤的作用机理。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1动物模型制备及分组选用健康雄性Wistar大鼠(SPF级)35只,体重250～300g左右。腹腔注射戊巴比妥钠4.5mg·(100g)-1,麻醉动物后行气管切开接微型呼吸机人工呼吸[呼吸频率60次·min-1,潮气量2ml·(100g)-1],沿胸骨左缘第4肋骨开胸在左心室、右心室与左心房交界处结扎/开放左冠状动脉前降支建立心肌缺血再灌注模型。将动物随机分成4组:正常对照组(不做任何处理);假手术组(丝线穿过冠状动脉前降支但不结扎);缺血再灌注损伤组(I

7、R)(缺血/再灌注前静脉注射生理盐水0.8ml/12kg，结扎左冠状动脉前降支45min,再灌注120min);当归注射液预处理组(在结扎前20min，静脉注射当归注射液0.8ml/kg,其它处理同缺血/再灌注组)。　　1.2主要试剂　　25%当归注射液(武汉大学中南医院制药厂);即用型兔抗鼠FAK单克隆抗体，即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒，DAB显色试剂盒及多聚赖氨酸。以上试剂均购于北京中山生物技术有限公司。　　1.3方法　　1.3.1常规HE染色取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色。　　1.3.2免疫组织化学SP法检测FAK相关抗原主要步骤