当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后cdk2蛋白的表达

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1、当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后CDK2蛋白的表达作者：冯金彩喻小红李培安【摘要】　　目的：观察当归对缺血再灌注损伤心肌细胞内CDK2蛋白表达的影响，探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的机理。方法:将35只SD大鼠随机分成4组：正常对照组(n=5)、假手术组(n=10)、缺血再灌注组(n=10)、当归治疗组(n=10),建立在体心肌缺血再灌注动物模型。实验完毕后，将各组动物心肌组织做免疫组织化学染色，观察各组动物心肌细胞内CDK2蛋白表达的变化。利用HPIAS-2000图像分析系统测定CDK2蛋白在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果：正常对照组心肌细胞内CDK

2、2蛋白表达弱；当归治疗组心肌细胞内CDK2蛋白表达弱。假手术组心肌细胞内CDK2蛋白表达强，缺血再灌注损伤组CDK2蛋白表达强。图像分析结果显示，正常对照组、当归治疗组、假手术组与缺血再灌注损伤组之间CDK2蛋白的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01)；正常对照组与假手术组之间、当归治疗组与假手术组之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>005)。结论：当归注射液对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞的增殖起着重要的作用。【关键词】当归注射液缺血再灌注心肌CDK2蛋白　　心肌缺血再灌注损伤(ischemiareperfusioninjury,IRI)

3、在急性心肌梗死再灌注治疗的病理生理过程中起着重要的作用。近年来研究发现心肌缺血再灌注损伤与细胞凋亡有着密切的关系。赵明中等［1］研究发现心肌缺血再灌注可减少心肌缺血细胞凋亡,同时也能加速受损心肌细胞的凋亡过程，且凋亡细胞主要位于心肌纤维收缩带区域内和心肌梗死区周围。心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡随再灌注时间的延长而显著增多。近年来凋亡机制参与心肌缺血再灌注损伤成为临床研究的热点。　　目前在研究药物治疗心肌缺血方面还没有任何一种能绝对减少心肌梗死,对抗心肌缺血。当归为伞形科植物当归Angelicasinennsis(Oliv.)Diels的干燥根，味甘、辛,性温，能补血和血,调经止痛

4、,润燥滑肠。有.L.编辑。　　细胞周期的精密调控是细胞正常生长的关键性因素，而一系列的细胞周期蛋白依赖性激酶（CDKs）是细胞周期调控的核心装置［10］。CDKs的活性受到多种机制的调节，包括与调节亚单位cyclins结合，磷酸化与去磷酸化以及与CDK抑制因子CKIs结合。CDK2是酪氨酸蛋白激酶家族的成员之一，其基因定位于染色体12q13，编码33ku的蛋白质，为苏氨酸激酶，是细胞周期素依赖性激酶复合体的一个亚基，在G1/S期的转换中起关键作用，而G1/S的调控点又是细胞内外信号经过传递、整合汇集到细胞核,对细胞的增殖进行调控的关键点［11］。该点调控的异常与肿瘤的发生发展关系

5、密切。在G1期中,cyclinE和CDK2结合形成cyclinE-CDK2复合物，它不仅作用于G1/S期,还对于DNA复制的启动非常重要。在G1期中，cyclin和CDK结合，导致CDK活化使视网膜母细胞瘤易感基因(retinobla-stoma,Rb)的蛋白产物磷酸化,失去对转录因子E2F-1的抑制,E2F-1作用于二氢叶酸还原酶靶基因,加速细胞从G1期进入S期［12］。因此CDK2活性增高，可以促进细胞的增殖、分化，是细胞周期的正调节因子。Aika等用免疫组化的方法研究显示在40例儿童组急性白血病患者中CDK2表达增高。这些研究均提示CDK2与细胞的异常增殖有关，其异常表达能

6、促使细胞增殖加速。　　本实验采用免疫组织化学方法观察当归注射液对缺血/再灌注过程心肌组织中CDK2蛋白的表达,实验结果表明，正常对照组、当归治疗组、假手术组与缺血再灌注损伤组之间CDK2蛋白的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01)；正常对照组与假手术组之间、当归治疗组与假手术组之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>005)。因此我们推测CDK2在当归注射液对缺血/再灌注过程心肌组织中发挥了细胞周期正性调节因子的作用。　　缺血再灌注损伤本身是个多因素协同的过程,缺血再灌注组织发生细胞凋亡的机制也是一个多因素的过程,心肌细胞坏死与细胞凋亡有着

7、一些共同的始动因素,如氧自由基、钙离子超载、细胞因子的释放、中性粒细胞侵润等既可以引起细胞凋亡,也可以引起细胞坏死。无疑通过各个环节对抗细胞凋亡必然也会对抗细胞的坏死起一定的作用。现在对心肌缺血再灌注引起细胞凋亡的确切机制尚未阐明,对抗心肌细胞凋亡的治疗也大多处于动物试验阶段。特别是基因治疗离临床应用还有一段距离。　　从以上的实验结果和讨论来分析当归注射液为防治缺血再灌注损伤的应用具有重要的研究意义，并且为加强心肌保护作用提供重要的理论依据。并进一步证实缺血后处理对再灌注心肌细胞